刘 飞 张名远 王 凡 牛艺霖 闫文慧 伊瑞雅 霍建一

（洛阳师范学院，河南洛阳 471934）

锦鲤是由鲤（Cyprinus carpio）经人工选择与杂交等而形成的一类观赏鱼，素有“水中活宝石”之美称，已成为目前主要的名贵观赏鱼之一。为保证锦鲤品系纯正，长期进行近亲繁殖，导致其免疫力不断下降，疾病常发生，降低了观赏价值。因此，开发适宜于锦鲤养殖的饲料免疫增强添加剂很有必要。已有研究表明，红枣不仅味道鲜美、营养丰富，而且具有保护肝脏、抗氧化、增强机体免疫力、抗肿瘤等多种保健功能[1]。目前有关红枣及其提取物添加对鱼类生长和免疫影响的研究报道较少[2-4]，而对观赏鱼类相关报道更为鲜见。本试验以红枣提取物添加饲料饲喂锦鲤，初步研究其对锦鲤生长和内脏器官（肝胰脏和脾脏）非特异免疫指标的影响，从而探讨红枣作为锦鲤饲料促生长和免疫增强添加剂的可能性。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验所用锦鲤幼鱼为洛阳师范学院水产研究所繁殖、体形正常、无病、无畸形的金黄色锦鲤。暂养于直径1 m、高1 m的圆柱形饲养缸中备用，养殖用水为自来水（充气泵曝气48 h）。红枣提取物为陕西森弗天然制品有限公司提供的20∶1提取物。

1.2 试验设计

试验共设4个饲料配方处理组，即按锦鲤基础饲料配方（表1）中分别添加 0（CK）、0.25%、0.50%、1.00%的红枣提取物配制成4种试验饲料。饲料原料按比例配备后使用ZL-600制粒机制得颗粒饲料，风干密封后置于-20℃冰箱保存备用。

表1 锦鲤基础饲料配方

1.3 试验方法

供试鱼苗暂养7 d后，试验分组前停食24 h，选取大小基本一致、体质量（1.52±0.07）g、生长状态良好的锦鲤随机分成4个试验组，每组设置2个平行缸，每缸30尾。每组分别投喂上述已制备的4种试验饲料，试验养殖期为56 d。每天分早、中、晚3次进行定时、定点饱食投喂，以30 min吃完为宜，及时清理剩余饵料，日总投喂量为总体质量的2%～5%。全天用三合一多功能潜水泵和充气泵进行增氧、过滤和水体循环；及时清理粪便、清洗滤材并适量换掉底层水，以保持良好水质。饲养期间水温为20～28℃，pH 值为 7.2±0.2。

鱼体用酒精棉消毒后在冰上进行解剖，取出肝胰脏和脾脏放入离心管中，置于-80℃超低温冰箱中备用。

1.4 测定指标与方法

1.4.1 生长指标。养殖试验结束后停食24 h，各缸称量总重。每个试验组随机取36尾，测量体长、体质量。计算肥满度、增重率和特定生长率，公式如下：肥满度（g/cm3）=100×终末鱼体质量/终末鱼体长；增重率（%）=100×（终末鱼平均体质量-初始鱼平均体质量）/初始鱼平均体质量；

特定生长率（%）=100×（ln终末鱼平均体质量-ln初始鱼平均体质量）/试验天数。

1.4.2 生化指标。每试验组随机分别选5个肝胰脏和脾脏样品进行生化指标测定。总蛋白含量、酸性磷酸酶（acid phosphatase，ACP）活性、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，AKP）活性、过氧化氢酶（catalase，CAT）活性、丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量、总抗氧化能力（total antioxidant capacity，T-AOC）等指标均采用碧云天试剂盒进行测定。

1.5 数据统计与分析

采用Excel 2010进行试验数据整理，采用SPSS 13.0来进行单因素方差分析，采用LSD法进行平均数的多重比较。

2 结果与分析

2.1 添加红枣提取物对锦鲤生长相关指标的影响

不同试验组锦鲤肥满度、增重率、特定生长率等生长相关指标测定结果见表2。可以看出，相比CK，在3个添加红枣提取物处理组中，0.25%组和1.00%组的肥满度、增重率和特定生长率均略有减少，但在0.50%组中均略有增加。单因素方差分析及其多重比较结果均表明，此3个指标在各红枣提取物添加组与对照组之间无显著差异（P＞0.05）。

表2 饲料添加红枣提取物对锦鲤生长相关指标的影响

2.2 添加红枣提取物对锦鲤内脏器官非特异性免疫指标的影响

2.2.1 对锦鲤肝胰脏的影响。不同试验组锦鲤肝胰脏的 ACP、AKP、CAT、T-AOC、MDA 等非特异性免疫相关生化指标测定结果见表3。

表3 饲料添加红枣提取物对锦鲤肝胰脏生化指标的影响

从表3可以看出，3个红枣提取物添加组的锦鲤肝胰脏除MDA含量相对于CK减少外，其他4个指标均较CK增加。多重比较结果表明：与CK相比，ACP活性在红枣提取物添加量为0.25%和0.50%时显著增加（P＜0.05）；T-AOC在红枣提取物添加量为0.25%和1.00%时显著增加（P＜0.05）；MDA含量在红枣提取物添加量为0.50%时显著降低（P＜0.05）。其他处理组的这些指标均与CK之间没有显著差异（P＞0.05）。

2.2.2 对锦鲤脾脏的影响。不同试验组锦鲤脾脏的ACP、AKP、CAT、T-AOC、MDA 等非特异性免疫相关生化指标测定结果见表4。可以看出，总体上各生化指标在各试验组间情况有所不同。与CK相比，3个红枣提取物添加组脾脏AKP活性、CAT活性均增加，MDA含量减少；ACP活性和T-AOC方面，均表现为2个红枣提取物添加组增加、1个添加组基本持平。多重比较结果表明，脾脏的5个指标中，除红枣提取物添加量为0.50%时MDA含量显著低于CK（P＜0.05）外，其他各红枣提取物添加组均与CK之间无显著差异（P＞0.05）。

3 结论与讨论

3.1 结论

本试验结果表明，添加红枣提取物对锦鲤肥满度、增重率、特定生长率等生长指标没有显著影响，但添加适量的红枣提取物能显著提高肝胰脏ACP活性与总抗氧化能力，显著降低肝胰脏和脾脏的MDA含量，从而增强机体的非特异性免疫功能。

3.2 讨论

3.2.1 饲料添加红枣提取物对锦鲤生长的影响。本试验中，与对照组相比，添加红枣提取物的3个试验组锦鲤在肥满度、增重率、特定生长率等3个生长相关指标上均无显著变化。这说明饲料中添加红枣提取物对锦鲤生长几乎无影响。这一结果与添加红枣提取物对虹鳟的生长速度几乎无影响[2]基本一致，但与添加枣粉可显著提高猪、肉牛、绵羊的增重[5-7]等结果不一致。其原因很可能是这些试验动物都是陆生动物，而锦鲤是水生动物；此外，使用的红枣成分、添加形式及添加量不一致。已有研究表明，红枣提取物添加能提高鲤鱼[起始体质量为（10.79±0.05）g]的生长性能[3]，这与本研究不一致。这可能有以下2个原因：一是本试验使用的锦鲤个体较小，起始体质量为（1.52±0.07）g，难以很好地消化吸收红枣提取物；二是锦鲤相对于一般鲤鱼，其核心考量性状并非生长速度而是体色与体型，可能其生长性能与一般鲤鱼存在一定差异。

3.2.2 饲料添加红枣提取物对锦鲤非特异性免疫功能的影响。动物体内的磷酸酶根据其催化最适pH值可以分为ACP和AKP这2种，均参与营养物质的消化吸收和运转[8]。其中：ACP被认为是高等动物体内巨噬细胞溶酶体的标志酶，参与能量的转化和信号的转导，进而提高机体的非特异性免疫水平和营养代谢水平[9]；AKP是一种重要的代谢调控酶，其活性高低与动物生长性能关系密切[10]。在本试验中，与对照组相比，3个红枣提取物组锦鲤脾脏和肝胰脏的ACP和AKP活性均提高，且肝胰脏ACP活性在0.25%组和0.50%组显著提高。这很可能说明饲料添加一定浓度的红枣提取物能够通过提高机体组织，特别是肝胰脏ACP的活性，从而增强机体非特异性免疫功能。

抗氧化系统是鱼类非特异性免疫系统的重要组成部分之一，它由抗氧化酶（如CAT）和其他非酶类抗氧化物质等构成，可消减鱼类机体的自由基和活性氧，避免机体受到氧化损伤；MDA是机体脂质过氧化反应的主要代谢产物，能在一定程度上代表机体氧化的损伤结果；细胞内存在非酶促和酶促防御体系以清除自由基，非酶促体系主要通过T-AOC来检测，其大小反映了机体对外来刺激的代偿能力以及机体自由基代谢状态[11-12]。已有不少研究表明，红枣多糖能提高小鼠血清和肝脏中CAT等酶活力、降低其MDA含量[13-15]；马可为等[16]研究发现，适量的枣粉添加饲料能显著降低血清MDA含量；冯鑫欢等[17]研究发现，红枣水提物能降低糖尿病小鼠肝脏的MDA含量；Yu等[18]以西洋参和红枣提取物为原料制成复方制对小鼠连续灌胃能显著提高其肝、脾脏和血清中的CAT活性，显著降低其MDA含量；刘 飞等[2]研究表明，饲料添加红枣提取物能显著提高虹鳟肝CAT活性，显著降低其肾脏MDA含量。这些结果与本研究结果基本一致。本研究结果表明，饲料添加一定浓度的红枣提取物能在一定程度上提高肝胰脏和脾脏的CAT活性、T-AOC，以及降低其MDA含量，且肝胰脏T-AOC在0.25%组和1.00%组显著提高，肝胰脏和脾脏MDA在0.50%组均显著下降。这很可能说明一定浓度的红枣（及其提取物）能提高动物机体抗氧化能力。已有研究结果表明，添加红枣提取物能提高鲤鱼的非特异性免疫能力[3-4]。这与本研究结果具有一致性。本试验结果表明，对于锦鲤，其饲料中添加适量红枣提取物能够通过提高机体组织，特别是肝胰脏和脾脏的抗氧化能力，增强机体的非特异性免疫功能。