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Hepatology Communications|CRISPR介导的单碱基编辑可高效沉默HBV S基因

2022-11-25周豪,牛俊奇,ZHOUH

临床肝胆病杂志 2022年6期
关键词:密码子碱基编辑器

HBV感染是肝硬化和肝细胞癌的主要危险因素之一。聚集的规则间隔短回文重复序列(CRISPR)/CRISPR相关蛋白9(Cas9)已被用于精确编辑HBV基因组,并通过双链断裂(DSB)的非同源末端连接修复清除HBV。然而,CRISPR/Cas9介导的DSB引发宿主基因组的不稳定性,编辑基因组的效率较低,限制了其应用。CRISPR胞苷碱基编辑器(CBE)可以通过产生提前终止密码子来沉默基因。吉林大学第一医院和明尼苏达大学开展的一项联合研究开发了一种CRISPR碱基编辑器来精确编辑HBV基因组内的单核苷酸,从而沉默HBV基因的表达。

HBsAg由HBV S基因编码。研究者设计了一种单导向RNA(sgRNA)来编辑HBV S基因的第30个密码子,可将其从CAG(谷氨酰胺)修改成终止密码子TAG。研究者使用携带HBV基因组的人肝癌PLC/PRF/5细胞建立了表达CBE的稳定细胞系(PLC/PRF/5-CBE)。然后用慢病毒将sgRNA导入PLC/PRF/5-CBE细胞。结果发现在表型上71%的PLC/PRF/5-CBE细胞在S基因内形成了一个提前终止密码子。HBs mRNA水平显著降低。在PLC/PRF/5-CBE细胞中观察到HBsAg分泌减少92%。经gRNA_S治疗后,细胞内HBsAg也降低了84%。此外,在HBV基因组中预测的脱靶位点中未检测到脱靶效应。序列分析证实HBV基因型B、C、F、G和H的95%、93%、93%、9%和72%的S基因序列具有sgRNA的结合位点。

综上所述,CRISPR介导的单碱基编辑是沉默HBV S基因的有效方法,具有清除HBV的治疗潜力。

摘译自ZHOU H, WANG X, STEER CJ, et al. Efficient silencing of hepatitis B virus S gene through CRISPR-mediated base editing[J]. Hepatol Commun, 2022. DOI: 10.1002/hep4.1933. [Online ahead of print]

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