QuEChERS-UPLC-MS-MS快速检测大米中氟啶胺

2022-10-12黄霞,周春红,李洪琴

现代食品 2022年18期

氟啶胺（Fluazinam）是1988年由日本石原株式会社中央研究所开发的吡啶胺衍生物，二硝基苯胺类有机物广谱杀菌剂（结构式见图1），是一种线粒体氧化磷酰化解偶联剂，能够抑制孢子萌发、菌丝生长和孢子形成[1]，对交链孢属、疫霉属、单轴霉属、核盘菌属和黑星菌属非常有效，不仅可用于防治草莓灰霉病[2]、花生土传真菌病害[3]、茉莉白绢病[4]及辣椒[5]、人参[6]及葱[7]等作物上的病害，同时还可防治柑橘红蜘蛛[7]等虫害。在大米的种植过程中，也会使用氟啶胺预防病虫害。

图1 氟啶胺化学结构式图

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

AB4500Q液质联用仪，配有电喷雾离子源和大气压化学源（美国AB公司）；CP225D电子天平（赛多利斯）；LD4-2C离心机（北京京立离心机有限公司）。

甲醇中氟啶胺标准储备液（含量100 μg·mL-1，北京坛墨质检科技有限公司）；氯化钠、无水硫酸镁（分析纯，成都科隆）；乙腈（色谱纯，山东大禹）。

1.2 实验方法

1.2.1 标准系列溶液的配制

精密吸取氟啶胺标准物质1.0 mL于10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，得到10 μg·mL-1的标准贮备液。精密吸取1.0 mL氟啶胺标准贮备液于100 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成100 ng·mL-1的标准工作液。分别精密吸取标准工作液20 μL、50 μL、100 μL、200 μL、400 μL和800 μL于进样瓶中，空白基质定容至1.0 mL，得到浓度为2 ng·mL-1、5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、20 ng·mL-1、40 ng·mL-1和80 ng·mL-1的标准系列溶液。

1.2.2 样品溶液制备

取大米样品充分粉碎混匀，精密称取5.0 g，置于50 mL离心管中，加入5 mL超纯水，充分混匀，浸泡30 min后加入20 mL乙腈，充分振荡混匀，超声提取30 min，加入2.0 g无水硫酸镁，0.5 g氯化钠，涡旋1 min，4 000 r·min-1离心5 min。取上清液2 mL于装有50 mg PSA、100 mg无水硫酸镁的5 mL离心管中，涡旋1 min，5 000 r·min-1离心5 min，取上清液过滤膜上机。

1.2.3 液相色谱条件

色谱柱：C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；进样体积：5 μL；流速：1.0 mL·min-1；流动相：0.1%甲酸/水（A）和乙腈（B）；梯度洗脱程序：0～5.0 min，95%→5%A，5.1～10.0 min，5%A；10.1～15.0 min，95%A。

1.2.4 质谱检测条件

离子源：电喷雾离子源（ESI）；采集模式：多反应离子监测（MRM），负离子模式采集；离子源温度：600 ℃；电喷雾电压：5 500 V；气帘气压力：35 psi；喷雾气压力：60 psi；辅助气压力：70 psi；其余质谱条件如表1所示。

表1 待测组分质谱条件表

2 结果与分析

2.1 基质效应

化学分析中，基质指的是样品中被分析物以外的组分。基质常常对分析物的分析过程有显著的干扰，并影响分析结果的准确性。本实验中，大米样品提取液中非待测物的离子强度对分析物活度系数有影响，这些影响和干扰被称为基质效应。目前最常用的去除基质效应的方法是使标准曲线的基质和待测组分基质尽可能保持一致。本实验采用未含待测组分的空白大米提取液作为标准工作液的稀释剂，能有效去除基质干扰。

2.2 标准曲线、相关系数

本实验以待测组分的浓度（X）和色谱峰面积（Y）绘制标准曲线，获得线性回归方程。标准曲线线性范围为2～80 ng·mL-1，相关系数R为0.999 7。标准曲线见图2。

图2 氟啶胺标准曲线图

2.3 检出限、定量限

信噪比为3（S/N=3）时为方法检出限，信噪比为10（S/N=10）时为方法定量限。空白基质配标最低点st1浓度为2 ng·mL-1（谱图见图3、图4），信噪比为S/N=127.6。根据公式（1）得到方法检出限为0.009 μg·kg-1，定量限为0.03 μg·kg-1，能满足检验要求。

图3 标准品st1定量离子图谱

图4 标准品st1定性离子图谱

式中：X为方法检出限，μg·kg-1；S/N为信噪比；C(st1)为st1浓度，ng·mL-1；n为稀释倍数；V为定容体积，mL；m为样品质量，g。

2.4 回收率、RSD

选用阴性大米样品，分别在8 μg·kg-1、40 μg·kg-1、160 μg·kg-1低、中、高3个加标水平，按照1.2.2样品溶液的制备方法进行前处理，高、中、低3个浓度各6个平行样，按照1.2.3、1.2.4检测方法进行上机检测，结果见表2。160 μg·kg-1加标回收氟啶胺离子图谱见图5、图6。