刘甦苏 吴 勇 谷文达 曹 愿 翟世杰 赵皓阳 范昌发

(中国食品药品检定研究院 实验动物资源研究所，北京 102629)

CRISPR-Cas9基因编辑技术是目前使用最为广泛的编辑技术，该系统由sgRNA和Cas9蛋白组成，sgRNA与Cas9结合并引导Cas9到达DNA靶点，Cas9作为核酸内切酶对靶序列进行切割，形成DNA双链断裂，实现特定基因的敲除或插入[1]。与锌指核酸酶(zincfinger nucleases，ZFNs)[2]、ES细胞打靶[3]和转录激活因子样效应物核酸酶(transcription activator-like effector nucleases，TALENs)[4]等基因编辑工具相比，CRISPR-Cas9技术更加高效且快速，可以精确地控制细胞内基因的表达水平[5]。

巨噬细胞集落刺激因子受体(colony stimulating factor-1 receptor,CSF-1R)属于受体酪氨酸激酶家族，及其配体CSF-1 (colony stimulating factor-1)的过表达广泛存在于各类实体肿瘤中，并在肿瘤恶性增殖、转移和微环境调控等方面发挥着重要的作用。CSF-1R信号传导控制着巨噬细胞的分化和存活，且对肿瘤中相关巨噬细胞的促进和免疫抑制起着关键的作用。研究表明，阻断CSF-1/CSF-1R通路可显著降低巨噬细胞在肿瘤部位的浸润，并减缓原发性肿瘤生长、减少肿瘤转移。因此，CSF-1R成为了迄今巨噬细胞研究最成熟的靶点之一，大批针对该靶点的抗体药物及小分子抑制剂处于研发阶段[6-10]。

人鼠CSF-1R基因同源性存在差异，能识别人CSF-1R受体分子的药物或者抗体不一定能识别鼠CSF-1R，因而给评价针对此靶点的抗体和药物带来困难。为满足CSF-1R靶点人源化小鼠模型在药企及研究的需要，本文尝试利用CRISPR-Cas9基因编辑系统，构建人源化CSF-1R基因敲入小鼠，并对其表达特性、模型资源冷冻保存进行初步探索，为这类肿瘤免疫药物的临床前筛选与评估提供有效的工具[11-12]。……