马晓艳

河南省平顶山市第一人民医院 467000

肺癌为常见恶性肿瘤，发病率、死亡率均位于我国恶性肿瘤首位，近年来仍呈逐年递增趋势。肺癌包括小细胞肺癌、大细胞癌、鳞癌、腺癌等，其中以肺腺癌最为常见，约占肺癌的40%，由于肺腺癌早期无明显症状，多数患者确诊时病情已经恶化[1-2]。当前肺腺癌的治疗临床效果一般，这可能是由于癌细胞中基因数目表达较多，因此临床亟需找寻新型分子作用靶点作为肺癌诊断及治疗的依据。研究指出，不同肿瘤调控蛋白表达可影响肺部腺体上皮细胞增殖、侵袭，参与肺腺癌发生、发展[3]。S100A6属于钙结合蛋白家族成员，可结合钙离子分解上皮细胞间质，提升癌细胞扩散、变形能力；结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor，CTGF)属生长因子CCN基因家族成员，其可对肿瘤生长、迁移具有抑制作用[4-5]。本文选取我院98例肺腺癌患者作为观察对象，旨在探究CTGF、S100A6的表达与其临床病理特征关联性。报道如下。

1 资料和方法

1.1 一般资料 本研究经我院医学伦理委员会审核通过。选取2018年1月—2021年1月我院98例肺腺癌患者作为观察对象，其中女39例，男59例，年龄42～70岁，平均年龄(54.69±5.76)岁；肿瘤直径：<2cm 52例、≥2cm 46例；淋巴结转移：有47例、无51例；临床分期：Ⅰ期21例、Ⅱ期30例、Ⅲ期28例、Ⅳ期19例；分化程度：高分化25例、中分化45例、低分化28例；远处转移：有35例、无63例。

1.2 选取标准 (1)纳入标准：均经病理组织检查确诊；未实施放化疗治疗；均签署知情同意书。(2)排除标准：伴其他恶性肿瘤；合并重要器官功能障碍；精神异常、认知功能障碍；免疫系统疾病；凝血功能障碍。

1.3 方法

1.3.1 免疫组织化学染色。取病理组织及癌旁边缘>5cm正常组织；试剂：兔抗人多克隆抗体CTGF(武汉博士德生物技术有限公司)、兔抗人S100A6多克隆抗体(美国NeoMarkers公司)，SP试剂盒、多聚-L-赖氨酸、PBS粉剂、浓缩型柠檬酸组织抗原修复液(pH 6.0)、液体DAB酶底物显色试剂盒，由福州迈新生物科技有限公司提供。采用10%甲醛对采集标本实施固定，并石蜡包埋，常规石蜡切片，采用二甲苯脱蜡，脱水(不同梯度酒精)，脱水后在柠檬酸盐溶液中静置20min，采用PBS清洗，加入3% H2O2，并在室温环境反应10min，采用PBS清洗3次，5min/次，将切片置于EDTA抗原修复液内(pH=9.0)，微波修复(10min)，室温冷却，PBS清洗3次，5min/次，加入CTGF或S100A6多克隆抗体，在温度为4℃条件下静置过夜，次日取出后采用PBS清洗3次，加入辣根过氧化物酶标记的二抗，温度设置为37℃，静置30min；再采用PBS清洗3次后加入二氨基联苯氨显色，清洗(蒸馏水)后，苏木素复染，乙醇脱水、二甲苯透明，中性树胶封片。镜下摄像、阅片。

1.3.2 阳性结果判定。高倍镜(×400)下随机选取5个视野，统计阳性染色细胞数量，依照染色程度、阳性细胞百分比计分，其中按染色程度将棕色、黄色、淡黄色、无色分别计3分、2分、1分、0分；将阳性细胞百分比>75%、51%～75%、10%～50%、<10%分别计4分、3分、2分、1分；将染色程度与阳性细胞百分比之积评估CTGF、S100A6阳性情况，乘积<3分为阴性，反之为阳性。

1.4 观察指标 (1)比较癌组织、癌旁正常组织CTGF、S100A6阳性表达率。(2)比较不同临床病理特征患者CTGF、S100A6阳性表达率。(3)分析CTGF、S100A6与临床病理特征的关联性。

1.5 统计学方法 采用SPSS22.0统计学软件处理数据，计数资料用[n(%)]表示,行χ2检验，相关性采用Spearman相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 癌组织、癌旁正常组织CTGF、S100A6阳性表达率 肺腺癌组织中S100A6阳性表达率高于癌旁正常组织，CTGF阳性表达率低于癌旁正常组织(P<0.05)，见表1。

表1 癌组织、癌旁正常组织CTGF、S100A6阳性表达率比较[n(%)，n=98]

2.2 不同临床病理特征患者CTGF、S100A6阳性表达率 分期为Ⅰ～Ⅱ期、肿瘤分化程度为高分化、无淋巴结转移、无远处转移患者CTGF阳性率较高，分期为Ⅲ～Ⅳ期、肿瘤分化程度为低分化、淋巴结有转移、远处有转移患者S100A6阳性率较高(P<0.05)，见表2。

表2 不同临床病理特征患者CTGF、S100A6阳性表达率[n(%)]

2.3 CTGF、S100A6与临床病理特征的关联性 经Spearman相关分析，S100A6与分期、淋巴结转移、远处转移呈正相关(r=0.635、0.621、0.648，P均<0.05)，与肿瘤分化程度呈负相关(r=-0.632，P<0.05)；CTGF与分期、淋巴结转移、远处转移呈负相关(r=-0.651、-0.632、-0.627，P均<0.05)，与肿瘤分化程度呈正相关(r=0.659，P<0.05)。

3 讨论

数据调查指出，肺腺癌恶性程度较高，治疗难度大，手术及综合治疗后5年内死亡率仍然较高，有研究指出，免疫靶向治疗对于辅助肺腺癌治疗具有一定帮助[6]。因此，对癌组织中肿瘤相关蛋白进行分析，可为肺腺癌免疫靶向治疗提供依据，并为临床病情评估提供一定帮助。

S100A6属钙结合蛋白家族成员，可结合钙离子，促使胶原蛋白酶激活，进而加快细胞间质分解，S100A6水平过多可使癌细胞突破基底膜能力提升，增加癌细胞对血管内皮细胞、间质细胞黏附能力，有助于癌细胞的增殖、分化[7]。既往研究指出，S100A6水平提升可显著促使肺癌发展，降低肺癌患者对化疗的敏感性[8]。本文中通过分析肺腺癌患者S100A6表达情况发现，肺腺癌组织中S100A6阳性表达率高于癌旁正常组织，由此表明S100A6高表达可能参与肺腺癌的病情进展。分析原因在于S100A6可通过促使上皮—间质转化过程，提升肺泡上皮细胞浸润能力，为肿瘤细胞生长提供有利环境，促使肿瘤发展[9]。同时，本文分析不同病理特征患者S100A6表达情况发现，分期为Ⅲ～Ⅳ期、肿瘤分化程度为低分化、淋巴结有转移、远处有转移患者S100A6阳性率较高；经Spearman相关分析发现，S100A6与分期、淋巴结转移、远处转移呈正相关(P<0.05)，与肿瘤分化程度呈负相关(P<0.05)，可见S100A6不仅参与肺腺癌的发生，还参与肺腺癌的侵袭、转移等多种生物学过程，因此通过监测S100A6表达有助于了解肺腺癌患者生物学特征。

CTGF属于CCN家族成员，为分泌性糖蛋白的一种，可参与调节细胞游走、增殖、黏附、有丝分裂等，同时还可影响新生血管形成、肿瘤、纤维化等作用[10]。相关研究指出，CTGF在不同类型肿瘤中表达并不一致，其中CTGF在急性淋巴细胞性白血病中呈高表达状态，而在肝癌患者中呈低表达状态[11]。本文通过分析肺腺癌患者CTGF表达情况发现，肺腺癌组织中CTGF阳性表达率低于癌旁正常组织，分期为Ⅰ～Ⅱ期、肿瘤分化程度为高分化、无淋巴结转移、无远处转移患者CTGF阳性率较高，与分期、淋巴结转移、远处转移呈负相关(P<0.05)，与肿瘤分化程度呈正相关(P<0.05)。既往有研究指出，CTGF可通过依赖CRMP-1蛋白对肺腺癌转移、迁移发挥抑制作用，另有研究指出，CTGF高表达可阻断ERK信号通路进而抑制肿瘤细胞生长[12]。结合既往研究及本文结果推测CTGF可作为肿瘤抑制因子抑制肺腺癌的发生发展，但具体相关机制尚未明确，可做后续研究重点。

综上所述，S100A6、CTGF在肺腺癌患者癌组织中存在异常表达，且与临床病理特征具有一定关系，通过检测其水平可对肺腺癌情况进行评估，有助于指导临床治疗。