农爱红 赵聪 陆春礼 李雪珍 黄百花

（百色市动物疫病预防控制中心, 广西 百色 533000）

开展疫病净化是提高种鸡生产性能的关键, 为掌握某种鸡场主要疫病流行状况, 为制定种鸡疫病净化政策提供科学依据, 对百色市某种鸡场开展禽白血病、鸡白痢、高致病性禽流感、鸡新城疫等主要疫病病原和血清学调查。

禽白血病（Avian leukosis, AL）是一种免疫抑制病, 是由反转录病毒科的禽白血病病毒（Avianleukosis virus, ALV） 引起的禽类肿瘤性疾病之一, 本病主要为垂直传播, 病毒型间交叉免疫力很低, 雏鸡免疫耐受, 对疫苗不产生免疫应答, 常常以亚临床感染的形式感染鸡群, 导致鸡生长迟缓、继发细菌感染或干扰新城疫、禽流感等疫苗的免疫效果。目前对本病的控制尚无切实可行的方法, 开展种群净化, 减少种鸡群的感染率和建立无禽白血病的种鸡群是控制本病最有效措施。鸡白痢 （Plorum disease, PD） 是由鸡白痢沙门氏菌所引起的一种常见的传染病, 是危害养鸡业最严重的疾病之一, 本病可通过鸡蛋垂直传播, 也可接触传染, 排泄物是重要的传播媒介, 消化道感染是主要传染方式。张永第的研究显示, 母鸡感染了鸡白痢后, 严重影响种蛋的孵化率及雏鸡的成活率。高致病性禽流感（Highly pathogenic avian influenza, HPAI）与 新 城 疫 疫（Newcastle disease, ND）被农业农村部定为一类动物疫病, 为烈性传染性疾病, 对养禽业的威胁十分巨大。

动物疫病净化是实现疫病消灭与根除的重要措施。通过监测、检验检疫、隔离、扑杀等一系列综合措施, 在特定区域或场所消灭和清除病原, 从而达到在该范围内动物个体不发病和无感染的状态。《国家中长期动物疫病防治规划（2012—2020年）》HPAI、ND、AL和沙门氏菌列为种禽场优先防治的疫病, 规划明确引导和支持种畜禽企业开展疫病净化, 并设定了疫病净化考核标准。为此对百色市某种鸡场上述4种疫病进行检测, 目的是为了充分了解该种鸡场主要疫病的感染情况, 为种鸡场疫病防控及净化措施制定提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

采样鸡群为百色市某种鸡场, 该鸡场现存栏公鸡0.3万只、母鸡14万只。在鸡群中随机抽取50只公鸡和160只母鸡, 采集血清及泄殖腔棉拭子样品各210份, 用于抗体检测及病原学检测；另外再随机采集种用母鸡新鲜鸡蛋蛋清样品200份、泄殖腔棉拭子60份, 用于检测禽白血病P27（ALV-P27）抗原。 采样鸡群已按既定免疫程序进行免疫, 主要的免疫疫苗有重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗（H5N1 Re-11株+Re-12株, H7N9 H7 Re-2株）、新城疫活疫苗, 未免疫禽白血病及沙门氏菌疫苗。

禽流感H5N1（Re-11/Re-12）和H7N9（H7 Re-2）抗体检测试剂、阳性血清；新城疫抗体检测试剂、阳性血清；鸡白痢、鸡伤寒多价染色平板凝集试验抗原、阳性对照血清以及禽白血病P27抗原检测试剂盒均购自哈尔滨国生生物科技股份有限公司；禽白血病A/B亚群和J亚群抗体检测试剂盒购自禾旭（郑州）生物技术有限公司；禽流感荧光PCR检测试剂盒及新城疫PCR检测试剂盒均购自深圳澳东检验检测科技有限公司。

实时荧光定量PCR仪（LightCycler 96）由罗氏诊断产品（上海）有限公司生产；酶标仪（LabServ K3）由赛默飞世尔（上海）仪器有限公司生产；生化培养箱（BJPX-250）由山东博科生物产业有限公司生产；移液器（单道、多道）由艾本德（上海）国际贸易有限公司生产。

HPAI及ND免疫抗体检测按照国标GB/T 18936-2020 高致病性禽流感诊断技术与GB/T 16550-2020新城疫诊断技术进行检测；SP/SG抗体采用鸡白痢、鸡伤寒多价染色平板凝集试验抗原进行检测；ALV-A/B和ALV-J抗体检测采用禽白血病病毒抗体ELISA检测试剂盒进行检测；ALV-P27抗原检测采用禽白血病抗原ELISA检测试剂盒进行检测；HPAI及ND病毒病原学检测按PCR试剂盒说明书进行操作和结果判定。

2 结果与分析

2.1 种鸡群HPAI及ND免疫抗体检测

种鸡群HPAI及ND免疫抗体检测结果见表1。从检测结果来看, 鸡群的HPAI及ND的免疫抗体效价较高, HPAI（H5N1 Re-11）抗体合格率为97.14%, HPAI（H5N1 Re-12）抗体合格率为99.05%, HPAI（H7N9 H7-Re2）抗体合格率为93.33%, ND抗体合格率为99.52%。其中公鸡HPAI N5N1及ND免疫抗体效价比母鸡高, 但相差不大；值得注意的是公鸡HPAI H7N9免疫抗体合格率为82%, 远低于母鸡96.88%的抗体合格率。鸡群整体HPAI H7N9免疫抗体合格率虽然比较高, 但是抗体效价平均值比较低, 抗体的离散度较大。表明鸡群HPAI及ND的抗体效价范围较大, 整齐度较差, 对HPAI及ND的感染有一定的风险, 应对免疫抗体不达标者及时补免。

表1 种鸡群HPAI及ND免疫抗体检测结果

2.2 种鸡群SP/SG、ALV-A/B和ALV-J抗体检测

种鸡群SP/SG及ALV-A/B和ALV-J抗体检测结果见表2。由于没有免疫禽白血病及沙门氏菌疫苗, 抗体检测的结果基本可以代表种鸡群2种疫病的感染情况。从检测结果来看, 种鸡群整体SP/SG抗体阳性为23.81%, ALV-A/B抗体阳性率为5.24%, ALV-J抗体阳性率为2.38%。其中公鸡SP/SG抗体阳性率为38%, 母鸡SP/SG抗体阳性率为19.38%, 公鸡SP/SG抗体阳性率明显比母鸡高。禽白血病检测结果是公鸡ALV-A/B抗体阳性率为2%, 母鸡ALV-A/B抗体阳性率为6.25%；公鸡ALV-J抗体阳性率为0%, 母鸡为3.13%, 表明母鸡禽白血病阳性率明显比公鸡高。

表2 种鸡群SP/SG及ALV-A/B和ALV-J抗体检测结果

2.3 种鸡群HPAI、ND病原学检测

种鸡群HPAI、ND病原学检测结果（荧光PCR）如表3所示, 均为阴性。

表3 种鸡群HPAI、ND病原学检测结果

2.4 ALV-P27抗原检测

ALV-P27抗原检测结果如表4所示。共检测鸡蛋蛋清及泄殖腔棉拭子样品260份, ALV-P27抗原阳性率为3.85%；其中用鸡蛋蛋清检测ALV-P27抗原阳性率为5%；泄殖腔棉拭子检测ALV-P27抗原阳性率为0%。

表4 ALV-P27抗原检测结果

3 讨论

本次监测结果显示, 该种鸡场HPAI及ND病原学检测均为阴性；同时, HPAI及ND免疫抗体合格率均达到93%以上, 抗体合格率远高于农业农村部规定70%以上合格率的标准。但是检测结果显示有部分种禽个体的HPAI免疫抗体效价为0, 且鸡群HPAI及ND的抗体效价范围较大, 整齐度较差；HPAI H7N9免疫抗体合格率虽然比较高, 但是抗体效价平均值比较低；公鸡HPAI H7N9免疫抗体合格率为82%, 远低于母鸡96.88%的抗体合格率。针对检测中所发现的问题, 建议该种鸡场今后仍需定时进行抗体效价检测, 如发现抗体效价水平较低时应进行加强免疫, 同时应定时进行病原学检测, 淘汰带毒鸡或鸡群, 保证鸡群高致病性禽流感及新城疫的免疫无毒无疫状态。

从沙门氏菌检测结果来看, 该种鸡场SP/SG感染比较严重, 抗体阳性率达23.81%（表2）。其中公鸡的SP/SG抗体阳性率为38%, 母鸡的SP/SG抗体阳性率为19.38%, 说明种鸡群沙门氏菌感染比较严重。由于鸡白痢无疫苗进行防治, 使用药物预防又容易引起耐药, 因此采取净化是最好的防控手段, 需加强采样监测, 淘汰阳性家禽, 尤其是种公鸡。通过持续采取检测、淘汰措施, 最终达到对该病的净化。广西某农牧集团制定了行之有效的鸡白痢控制方案, 持续开展鸡白痢控制与净化工作, 2020年鸡白痢抗体阳性率控制在0.32%, 取得很好的净化效果, 其经验值得借鉴。

禽白血病血清学检测结果如表2所示, 约5%的种鸡受到ALV的感染, 其中ALV-A/B抗体阳性率为5.24%, ALV-J抗体阳性率为2.38%, ALV-A/ B感染比ALV-J严重。本次检测结果还显示, 母鸡的AL感染率比公鸡高, 这与刘梅的调查结果相同, 可能与母鸡对AL病原比较易感有关。本次监测还采集了不同的样本进行ALV-P27抗原检测, 检测结果如表4所示, 结果显示鸡群ALV-P27抗原阳性率为3.85%, 其中检测鸡蛋蛋清200份, 阳性率5%, 泄殖腔棉拭子未检出阳性, 可能与检测数量过少、采集与保存方式等有关。陈俊霞等的研究数据也表明, 不同类型鸡的泄殖腔棉拭子ALV-P27抗原检测法不仅有很高的假阳性率, 还有一定比例的漏检率。因此, 在种鸡场的ALV净化过程中不建议以泄殖腔棉拭子作为检测材料。禽白血病的净化艰难且复杂, 胡杰等从2013—2020年在广西11个重点种鸡场按照检测-淘汰-分群-再检测-再淘汰的原则净化AL, 总平均阳性率从2013年的12.16%, 下降到2020年的0.30%, 证明了其净化方法和思路的可行性, 值得在百色市种鸡场进行推广。

疫病净化需长期坚持, 要投入大量的人力物力及资金。张锐等研究发现, 养鸡场实施疫病净化第一年净收益有明显提高, 但第二年开始净收益增幅放缓, 直至五年以上才开始反弹。因此需要政府及动物防疫部门给予强力的支持, 寻求新的动物疫病净化监测新模式, 让养殖企业有信心、有动力把动物疫病净化工作坚持下去。除了引导和支持种畜禽企业开展疫病净化, 建立无疫企业认证制度, 建立市场准入和信息发布制度, 定期发布无疫企业信息, 还应该在动物疫病净化信息公开、企业产品质量安全信息透明等问题上, 帮助养殖企业建立产品高质量安全的品牌形象。本次调研结果说明该种鸡场主要疫病防控效果较好, 除SP/SG、AL感染外, 其他疫病得到有效控制。要进一步控制和消灭SP/SG、AL就需采取净化措施, 一是把好引种关, 从净化好的祖代场引入鸡种, 减少或杜绝病原菌通过种鸡传播；二是切实加强种鸡场的消毒剂环境监测工作；三是加强雏鸡饲料管理；四是做好免疫接种, 制定科学规范的免疫程序；五是加强种鸡场的净化检测。