刘艳红 邓霞飞 唐维 刘红华 方智 张茜 刘澍秾 郭峰

盐酸缬更昔洛韦是瑞士罗氏公司研发的口服抗巨细胞病毒感染药物,2001 年5 月经美国食品药品监督管理局(FDA)批准上市。适用于治疗成人获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者的巨细胞病毒(CMV)视网膜炎；预防存在CMV 感染风险的实体器官移植患者的CMV感染［1-3］。盐酸缬更昔洛韦是更昔洛韦的L-单缬氨酸酯,是更昔洛韦的前药,提高了更昔洛韦的生物利用度近10 倍,故缬更昔洛韦片剂较注射用更昔洛韦优势明显。该化合物在生物药剂学分类上属于生物药剂学分类系统(BCS)Ⅲ类,其在水溶液中的溶解度具有pH 依赖性,随pH 升高溶解度下降,在pH 4～6 范围内溶解度＞200 mg/ml,25℃且pH 7.0 时溶解度降至70 mg/ml,pH＜3.8 时稳定性最好。片剂长期储存过程中,易出现片子松散的情况,且有关物质明显增加［4-7］。本研究采用USP 40 版药典相关方法对不同批次盐酸缬更昔洛韦片万赛维的相关质量指标进行测定,分析不同批次检验指标是否存在差异,为临床安全用药提供依据。

1 仪器与试剂

1.1 仪器 高效液相色谱仪(型号Waters e2695、2489UV/VIS 检测器,Waters 公司),溶出试验仪(富科思FADT-1202RC 自动溶出仪、FADT-1202QY 自动取样仪组成)。

1.2 试剂 盐酸缬更昔洛韦(外购,纯度为99.6%),万赛维(外购,罗氏公司),甲醇(色谱纯,默克公司),盐酸(分析纯,国药集团),三氟乙酸(色谱纯,TEDIA公司)。

2 方法

2.1 含量测定方法 含量测定采用高效液相色谱法(HPLC 法)。

2.1.1 色谱柱 苯基硅烷键合胶为填充剂；流动相：0.25%三乙胺溶液(取三乙胺2.5 ml,加水800 ml,用三氟乙酸调节pH至3,加水稀释至1000 ml)-甲醇(93∶7)；流速：1.0 ml/min；检测波长：254 nm；柱温30℃；进样量：50 µl。

2.1.2 系统适用性溶液 取N-甲基缬更昔洛韦对照品适量,精密称定,加0.001 mol/L 盐酸溶液溶解并稀释制成每1 ml 中约含1 µg 的溶液,摇匀,精密量取此溶液5 ml 与下述对照品储备液15 ml,置50 ml 量瓶中,加0.001 mol/L 盐酸溶液稀释至刻度,摇匀,作为系统适应性试验溶液。取此溶液50 µl 注入液相色谱仪,记录色谱图,第2 个缬更昔洛韦差向异构体峰与第1 个N-甲基缬更昔洛韦差向异构体峰的分离度应＞2。

2.1.3 对照品溶液 精密称取盐酸缬更昔洛韦对照品约26 mg,精密称定,置100 ml 量瓶中,加0.001 mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品储备液；精密量取对照品储备液15 ml,置50 ml 量瓶中,加0.001 mol/L 盐酸溶液稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。

2.1.4 供试品溶液 取本品20 片,精密称定,研细,精密称取适量(约相当于缬更昔洛韦450 mg),置100 ml 量瓶中,加0.001 mol/L 盐酸溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取续滤液3 ml,置200 ml 量瓶中,加0.001 mol/L 盐酸溶液稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。

2.1.5 测定法 精密量取供试品溶液和对照品溶液各50 μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图,按外标法以峰面积计算,即得。

2.2 有关物质测定方法 有关物质测定采用HPLC 法。

色谱柱：苯基硅烷键合胶为填充剂；流动相：0.25%三乙胺溶液(取三乙胺2.5 ml,加水800 ml,用三氟乙酸调节pH 至3,加水稀释至1000 ml)-甲醇(93∶7)；流速：1.0 ml/min；检测波长：254 nm；柱温30℃；进样量：50 µl。

对照品溶液：取含量测定项下的缬更昔洛韦对照品溶液作为对照品溶液。

样品溶液：取本品细粉适量(约相当于缬更昔洛韦45 mg),精密称定,置100 ml 量瓶中,加0.001 mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液。取供试品0.2 ml,置100 ml 量瓶中,加0.001 mol/L 盐酸溶液稀释至刻度,摇匀,作为对照溶液。

测定法：精密量取供试品溶液、对照溶液和对照品溶液各50 µl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图至主成分峰保留时间的2 倍。按外标法以缬更昔洛韦计算更昔洛韦和鸟嘌呤相当于缬更昔洛韦标示量的含量,以自身对照法计算未知杂质的含量,应符合规定。见表1。

表1 杂质含量判定表

2.3.4 种溶出介质配制方法

2.3.1 pH 1.0 盐酸溶液配制方法 量取9 ml 浓盐酸(37%)加水稀释成1000 ml,即得。

2.3.2 pH 4.5 醋酸-醋酸钠溶液配制方法 称取醋酸钠2.99 g,加冰醋酸1.596 ml,稀释成1000 ml,即得。

2.3.3 pH 6.8 磷酸二氢钾-氢氧化钠溶液配制方法磷酸二氢钾6.805 g,氢氧化钠0.944 g,加水稀释成1000 ml,即得。

2.3.4 溶出介质 纯化水为溶出介质。

2.4 溶出曲线测定方法 取本品12 片,以溶出介质900 ml 为溶剂,转速为50 r/min,于5、10、15、30 min各取样10 ml,滤过,精密量取续滤液1 ml,置25 ml 量瓶中,加0.1 mol/L 盐酸溶液稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液；另取盐酸缬更昔洛韦对照品约25 mg,精密称定,置100 ml 量瓶中,加0.1 mol/L 盐酸溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取2 ml,置25 ml 量瓶中,加0.1 mol/L 盐酸溶液稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液；取上述两种溶液,照紫外-可见分光光度法,在254 nm 波长处分别测定吸光度,计算各个取样点的溶出量［8］。

3 结果

3.1 三批盐酸缬更昔洛韦片万赛维检测结果 三批盐酸缬更昔洛韦片万赛维的含量、有关物质及溶出度无明显差异,批间均一性较好。见表2。

表2 三批盐酸缬更昔洛韦片万赛维检测结果(%)

3.2 三批盐酸缬更昔洛韦片万赛维在不同介质中的溶出曲线数据 依照溶出曲线的测定方法,分别测定盐酸缬更昔洛韦片万赛维在4 种不同溶出介质中的溶出曲线,其溶出曲线对比显示,三批盐酸缬更昔洛韦片万赛维在不同溶出介质中的溶出曲线数据无明显差异,批间均一性较好。见表3,表4,表5,表6。

表3 三批盐酸缬更昔洛韦片万赛维在pH 1.0 介质中溶出曲线数据

表4 三批盐酸缬更昔洛韦片万赛维在pH 4.5 介质中溶出曲线数据

表5 三批盐酸缬更昔洛韦片万赛维在pH 6.8 介质中溶出曲线数据

表6 三批盐酸缬更昔洛韦片万赛维在水介质中溶出曲线数据

4 讨论

服用缬更昔洛韦后更昔洛韦的生物利用度在各种研究人群中是相似的。心脏、肝脏和肾脏移植患者根据肾脏功能调整方案口服缬更昔洛韦后机体更昔洛韦暴露量相似。仅在进餐情况下,口服缬更昔洛韦450～2625 mg 与更昔洛韦AUC 成剂量比例关系。

4.1 吸收 缬更昔洛韦是更昔洛韦的前体药物,能很好地从胃肠道吸收并快速在小肠壁和肝内代谢成更昔洛韦。从缬更昔洛韦转化来的更昔洛韦的绝对生物利用度大约60%。缬更昔洛韦的全身暴露少而且是一过性的,24 h 曲线下面积(AUC24)和峰浓度(Cmax)分别仅为更昔洛韦的1%和3%。口服盐酸缬更昔洛韦片450～2625 mg 的剂量与更昔洛韦AUC 的比例关系是在餐后情况下研究的。当与食物同服900 mg 的盐酸缬更昔洛韦片时,以更昔洛韦测定的平均AUC24 和Cmax都增大,分别为30%和14%。建议盐酸缬更昔洛韦片与食物同服。

4.2 分布 由于缬更昔洛韦迅速转化成更昔洛韦,未测定盐酸缬更昔洛韦的蛋白结合率。更昔洛韦的浓度在0.5 μg/ml 和51 μg/ml 以上时血浆蛋白结合率是1%～2%,静脉给药后更昔洛韦的稳态分布容积是(0.680±0.161)/kg。

4.3 代谢 缬更昔洛韦快速水解成更昔洛韦；没有发现其他的代谢产物。口服单次1000 mg 放射标记的更昔洛韦后,在粪便或尿中检测到的放射活性产物不超过1%～2%。

4.4 清除 口服盐酸缬更昔洛韦片后,盐酸缬更昔洛韦片清除的主要途径是肾脏排泄,方式为肾小球滤过和肾小管主动分泌更昔洛韦。更昔洛韦通过肾清除占全身清除的(81.5±22.0)%。

多项研究显示［7,8］,盐酸缬更昔洛韦片药理作用明显,作用机制较新颖,毒性低,不良反应少,临床疗效显著,患者依从性高,应用安全。

综上所述,通过对盐酸缬更昔洛韦片万赛维三批样品相关数据进行分析,表明盐酸缬更昔洛韦片万赛维不同批次之间重现性较好,批间差异在可接受范围内,各项指标无明显差异,是仿制药品优良的参比制剂,临床上也可以放心使用。