张 辉，符才东

（1. 海南省药品和医疗器械审评服务中心，海南 海口 570216； 2. 海南省食品药品检验所海口分所，海南 海口 570311）

盐酸托莫西汀为（R）-N-甲基-3-2-（甲苯氧基）- 3 - 苯丙基胺盐酸盐，属去甲肾上腺素递质再摄取抑制剂，2003 年由Lilly 公司研发成功并在美国上市，是首个用于治疗注意缺陷多障碍的非兴奋性药物［1-5］。盐酸托莫西汀口服溶液具有易吸收、给药方便、口感好的优势，易为患者特别是儿童和婴幼儿所接受。有文献报道采用高效液相色谱（HPLC）法、紫外分光光度法和化学发光法测定盐酸托莫西汀原料药和胶囊中主药含量［6-14］，而其口服溶液中主药含量测定方法尚未见报道。本研究中建立了测定盐酸托莫西汀口服溶液中盐酸托莫西汀含量的HPLC 法，为评价和控制该制剂的质量提供了依据。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Ultimate 3000 型高效液相色谱仪（美国Dionex 公司）；Ex125ZH 型电子天平（美国Ohaus 公司）；FE28 型pH计（瑞士Mettler Toledo公司）。

1.2 试药

盐酸托莫西汀对照品（中国食品药品检定研究院，批号为510143 - 201701，含量99.7%）；盐酸托莫西汀口服溶液3 批（A 厂，批号分别为210201，210601 - 2；B 厂，批号为9071B）；正丙醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent Extend C18柱（75 mm × 4.6 mm，3.5µm）；流动相：A为pH 2.5磷酸-氢氧化钾缓冲液-正丙醇（90∶10，V/V），B为pH 2.5磷酸 - 氢氧化钾缓冲液 -正丙醇（65∶35，V/V），梯度洗脱（0～9 min 时100%A→30%A，9～15 min 时 30%A，15～15.5 min 时 30%A→100%A，15.5～25 min 时100%A）；流速：1.0 mL/min；检测波长：215 nm；柱温：40 ℃；进样量：10 µL。

2.2 溶液制备

取磷酸2.9 g，精密称定，加水1 L，搅拌溶解后加5 mol/L 氢氧化钾溶液调溶液pH 至2.5，加入1-辛烷磺酸钠7.56 g，再加正丙醇，制成pH 2.5 磷酸 - 氢氧化钾缓冲液 - 正丙醇（80∶20，V/V），作为稀释剂。取盐酸托莫西汀对照品91.4 mg，精密称定，置100 mL 容量瓶中，加稀释剂溶解并定容，摇匀，即得对照品贮备液；精密吸取5 mL，置10 mL 容量瓶中，加稀释剂定容，制成质量浓度为0.46 mg/mL 的对照品溶液。精密量取样品溶液5 mL，置50 mL 容量瓶中，加稀释剂制成质量浓度为0.46 mg/mL 的供试品溶液。按盐酸托莫西汀口服溶液处方及工艺制备缺盐酸托莫西汀的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

系统适用性与专属性试验：精密吸取2.2项下对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各10µL，按2.1项下色谱条件进样测定，记录色谱图，详见图1。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液相应位置有吸收峰，理论板数按盐酸托莫西汀峰计应不小于3 000，分离度均大于1.5，且阴性对照无干扰，表明适用性与专属性良好。

图1 高效液相色谱图Fig.1 HPLC chromatograms

线性关系考察：精密量取2.2 项下对照品贮备液2.5，4.0，5.0，6.0，7.5 mL，分别置10 mL 容量瓶中，加稀释剂定容，摇匀，按2.1项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以待测成分质量浓度（X，mg/mL）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y=29.565 8X+64.556 7（r=0.999 9，n=5）。结果表明，盐酸托莫西汀质量浓度在0.227 8～0.683 4 mg/mL 范围内与峰面积线性关系良好。

定量限考察：精密量取2.2 项下对照品溶液，逐级稀释，按2.1 项下色谱条件进样测定，以信噪比为10∶1的待测成分质量浓度作为定量限。结果盐酸托莫西汀的定量限为0.068 3µg/mL。

精密度试验：精密吸取2.2项下对照品溶液10µL，按2.1 项下色谱条件连续进样测定6 次，记录峰面积。结果盐酸托莫西汀峰面积的RSD为0.03%（n= 6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取供试品溶液，分别于室温下放置0，4，8，12，16，20，24 h 时，按 2.1 项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果盐酸托莫西汀峰面积的RSD为0.28%（n=7），表明供试品溶液在室温下放置24 h内基本稳定。

重复性试验：取同一批（批号为210201）样品，按2.2项下方法平行制备6 份供试品溶液，按2.1 项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算含量。结果盐酸托莫西汀的平均含量为96.54%，RSD为0.29%（n=6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：精密量取阴性对照品溶液9 份，每份5 mL，分别精密加入对照品贮备液适量，按2.2 项下方法制备供试品溶液，按2.1 项下色谱条件进样测定，记录峰面积，并计算回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果（n=9）Tab.1 Results of the recovery test（n=9）

2.4 样品含量测定

取3 批样品适量，按2.2 项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件进样测定，记录峰面积，并采用外标法计算盐酸托莫西汀含量。结果批号为210201，210601-2，9071B样品的含量分别为96.44%，96.70%，98.02%，平均97.05%（n=3）。

3 讨论

查阅相关文献，虽有建立HPLC 法测定盐酸托莫西汀原料药含量的报道，但均为等度洗脱，样品主峰分离效果欠佳。预试验中考察了0.8 mL/ min、1.0 mL/ min和1.2 mL/min 流速对测定结果的影响，结果表明更改流速对样品检测结果无影响；分别采用Agilent Extend C18柱（75 mm ×4.6 mm，3.5µm）、依利特 Hypersil BDS柱（250 mm × 4.6 mm，5 µm）和Shimadzu VP - ODS 柱（150 mm × 4.6 mm，5 µm）考察结果，发现Agilent Extend C18柱（75 mm × 4.6 mm，3.5 µm）分离效果好且分析时间短；分别采用35，40，45 ℃柱温测定，发现对测定结果无明显影响。破坏性试验结果表明，色谱主峰与各杂质峰完全分离。

综上所述，本研究中所建方法灵敏度高、专属性强、耐用性好、重复性好，可用于盐酸托莫西汀口服溶液的含量测定。