霍 苗 张 倩 杨 光 郑星星 徐瑞芬

陕西省人民医院 1麻醉科，2烧伤整形美容医学外科 陕西 西安 710068

感染性休克是由病原微生物及其毒素等产物所引起的脓毒病综合征，以抗感染、抗休克为主要治疗手段。乌司他丁为常用的广谱蛋白酶抑制剂，可用于感染性休克患者的治疗，虽然可在一定程度上改善患者的临床症状，但多数患者预后不理想［1，2］。而右美托咪定可抑制交感神经去甲肾上腺素释放，降低体内内源性儿茶酚胺浓度，改善血流动力学，增加感染性休克患者对外源性血管活性药物的敏感性［3，4］。本研究建立感染性休克模型，并使用乌司他丁、右美托咪定干预，探究二者联合应用对感染性休克的作用，为临床上感染性休克的治疗提供新方向。报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料实验动物：选取75 只健康SD 大鼠，由凯学生物科技（上海）有限公司提供。鼠龄3～10 个月，体质量200～250 g，饲养温度为22～25 ℃，室内湿度35%～40%，饲养室定时进行紫外线照射消毒。统一给予标准饲料，允许自由活动，饲养时间为1 周。本研究实验获得陕西省人民医院伦理委员会批准。

主要试剂来源：小鼠抗大鼠肿瘤坏死因子⁃α（tu⁃mor necrosis factor⁃α，TNF⁃α）、白细胞介素（interleu⁃kin，IL）⁃1、IL⁃6 一 抗 和 二 抗（美 国Affinity 抗 体 公司），PBST 洗涤剂（美国Agdia 公司），鲎试剂［湛江安度斯生物有限公司，批号：（94）卫药准字SJ⁃01］，乌司他丁（广东天普生化医药股份有限公司，批号：国药准字H20040505，规格1 mL、5 万单位），右美托咪定（江苏恩华医药股份有限公司，批号：国药准字H20110085，规格：2 mL∶200 μg）。

1.2 方法

1.2.1 建模及分组 选取75 只中的15 只作为A组，其余60 只大鼠均参照参考文献［5］建立感染性休克大鼠模型，大鼠腹腔注射戊巴比妥钠40 mg/kg麻醉后，暴露右侧腹股沟，游离右侧股动脉，结扎远端，近端插入聚乙烯导管，连接动脉测压装置，持续监测平均动脉压。游离右侧股静脉，插入聚乙烯导管，股静脉给予10 mg/kg 脂多糖（LPS）。暴露背部皮肤，分离脊斜肌，置于显微镜下观察微循环血流，持续滴入生理盐水保持脊斜肌表面湿润。用正置荧光显微镜+定量荧光比率成像测量系统软件行每次30 min 录像采集局部微循环图像，待平均动脉压降至初始血压2/3 时，脉压<20 mmHg 即为造模成功，在建模成功后拔除动静脉导管。最终建模成功55 只，分 为B 组（15 只）、C 组（14 只）、D 组（13只）、E 组（13 只）。

1.2.2 药物干预 建模成功后，C 组腹腔注射20 μg/g 乌司他丁；D组腹腔注射100 μg/kg 右美托咪定；E 组大鼠腹腔注射20 μg/g 乌司他丁+100 μg/kg 右美托咪定。A 组、B 组大鼠腹腔注射20 μg/g 生理盐水。给药6 h 后观察大鼠疾病变化，在给药干预过程中B 组5 只大鼠因感染加重死亡。

1.2.3 切片及染色 所有大鼠在禁食和禁水后，行断头处死，立即取心肌组织，使用40 mL/L 的多聚甲醛固定，脱水后石蜡包埋，制作5 μm 心肌组织切片，HE 染色，观察。

1.2.4 心功能及血压检测 均行颈部手术，分离右侧颈总动脉插管，连接生物机能实验系统记录心率（HR）、颈总动脉收缩压（SBP）、舒张末期压力（DBP）、脉压差以及最大上升/下降速率（±dp/dt⁃max），重复测量3 次，取平均值。

1.2.5 内毒素检测 分别取颈总动脉和门静脉血在抗凝管中保存待用，使用显色鲎试剂定量测定法测定，并做好记录，重复测量3 次，取均值。

1.2.6 炎症指标、感染性标志物水平检测 取各组大鼠尾部静脉血3 mL，以离心半径为5 cm、以转速3 000 r/min 离心处理10 min，分离上层血清，-80 ℃保存，采用酶联免疫吸附试验法检测大鼠炎症指标TNF⁃α、IL⁃1、IL⁃6、感染性标志物降钙素原（procalcitonin，PCT）、C⁃反应蛋白（C⁃reactive protein，CRP）、前白蛋白（prealbumin，PA）、癌蛋白TRE 水平。

1.3 统计学处理采用SPSS 19.0 统计软件包统计分析处理。计量资料采用均数±标准差（±s）描述，三组间比较采用F检验，两组间比较采用独立样本t检验，P<0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 心肌细胞形态学观察如图1 所示，A 组大鼠心肌细胞形态正常无任何损伤；B 组大鼠心肌细胞变性，实质紊乱，有嗜酸细胞质，核染色过深；C 组、D 组及E 组大鼠休克导致的心肌损伤均减弱，其中E 组大鼠心肌损伤减弱程度最为明显。

图1 5 组大鼠心肌细胞形态学HE 染色照片（×200）

2.2 各组大鼠一般症状观察建模成功后至给药结束，A 组大鼠无死亡，体温正常；B 组大鼠因感染加重死亡5 只，体温显著升高，眼睛无神、暗淡，毛色无光泽，活动迟缓，无进食；C 组大鼠死亡2 只、D 组大鼠死亡1 只、E 组大鼠死亡1 只，C、D、E 三组大鼠体温相比B 组均有所降低，但仍高于A 组，毛色恢复光泽，活动量增加，进食逐渐恢复正常，但E 组大鼠症状改善最为明显。最后A 组15 只、B 组10 只、C组12 只、D 组12 只、E 组12 只用于后续指标检测。

2.3 各组大鼠心功能及血压的变化比较如表1所示，B 组、C 组、D 组、E 组大鼠心功能及血压各指标均低于A 组，具有统计学差异（P<0.05）；E 组大鼠各指标均高于C 组、D 组，具有统计学差异（P<0.05）；C 组、D 组各指标比较，无统计学差异（P>0.05）。

表1 各组大鼠心功能及血压的变化比较(-x±s)

2.4 各组内毒素浓度对比如表2 所示，B 组、C组、D 组、E 组大鼠各指标含量高于A 组，具有统计学差异（P<0.05）；E 组各指标含量低于C 组、D 组，具有统计学差异（P<0.05）；C 组、D 组比较，无统计学差异（P>0.05）。

表2 各组内毒素含量对比(±s)

表2 各组内毒素含量对比(±s)

aP<0.05，与A 组相比；bP<0.05，与B 组相比；cP<0.05，与C 组相比；dP<0.05，与D 组相比

组别A 组B 组C 组D 组E 组FP例数15 10 12 12 12--门静脉内毒素（EU/mL）0.10±0.01 0.26±0.05a 0.16±0.11ab 0.17±0.12ab 0.12±0.02abcd 5.085<0.005动脉内毒素（EU/mL）0.04±0.01 0.19±0.05a 0.12±0.11ab 0.13±0.10ab 0.07±0.02abcd 7.628<0.005

2.5 各组炎症指标、感染性标志物比较如表3 所示，B 组、C 组、D 组、E 组TNF⁃α、IL⁃1、IL⁃6、PCT、CRP 水平高于A 组，PA、TRE 水平低于A 组，具有统 计 学 差 异（P<0.05）；E 组TNF⁃α、IL⁃1、IL⁃6、PCT、CRP 水平均低于C 组、D 组，PA、TRE 水平均高于C 组、D 组，具有统计学差异（P<0.05）；C 组、D 组比较，无统计学差异（P>0.05）。

表3 各组大鼠炎症指标、感染性标志物比较(±s)

表3 各组大鼠炎症指标、感染性标志物比较(±s)

aP<0.05，与A 组相比；bP<0.05，与B 组相比；cP<0.05，与C 组相比；dP<0.05，与D 组相比

组别A 组B 组C 组D 组E 组FP例数15 10 12 12 12--TNF⁃α（ng/L）51.25±5.13 216.35±22.64a 125.25±13.68ab 126.64±13.64ab 70.25±7.62abcd 11.594<0.005 IL⁃1(ng/L)10.25±1.03 25.46±3.13a 18.72±2.22ab 18.69±2.19ab 14.62±2.25abcd 10.076<0.005 IL⁃6(ng/L)21.24±2.00 65.23±6.92a 40.12±4.68ab 40.23±4.62ab 32.16±3.02abcd 21.054<0.005 PCT（ng/mL）1.25±0.32 28.96±2.46a 11.25±1.13ab 11.06±1.25ab 3.25±0.24abcd 26.937<0.005 CRP（mg/L）25.25±1.20 85.26±8.96a 41.35±4.52ab 41.25±4.16ab 35.26±3.02abcd 17.660<0.005 PA（mg/L）354.25±35.46 201.55±20.46a 284.36±28.26ab 285.49±28.24ab 312.25±31.65abcd 4.807<0.005 TRE（g/L）3.89±1.05 1.45±0.25a 2.04±0.34ab 2.03±0.36ab 2.62±0.54abcd 5.700<0.005

3 讨论

感染性休克疾病较为严重，若不能采用及时有效的措施对此类患者进行救治，可引发患者多器官持续低灌注，进而使得机体多器官衰竭，最终导致死亡的发生［6］。

乌司他丁是一种广谱的蛋白酶抑制剂，具有抑制炎性因子分泌的作用，还能够使多种水解酶的活性下降［7］。有学者在研究中表示，乌司他丁能够抑制机体氧自由基的生成以及抑制炎症因子的表达和分泌［8］。右美托咪定作为一种广谱的相对选择性α2⁃肾上腺素受体激动剂，能够抑制去甲肾上腺素的释放以及炎性因子的分泌，具有一定的调节免疫功能以及抑制炎症反应的作用［9，10］。本文结果发现，乌司他丁联合右美托咪定可修复感染性休克大鼠心肌损伤，减少心肌损害。

目前研究发现，内毒素为感染性休克的主要致病因子，其主要化学本质为脂多糖，经多种信号转导机制，诱发机体细胞炎症反应，促进炎症因子生成，引发机体全身性过度炎症反应综合征［11，12］。本文研究结果证实，E 组大鼠门静脉、动脉内毒素含量均下降，说明乌司他丁联合右美托咪定能降低内毒素水平，控制感染。临床研究显示，感染性休克发生后由于组织灌注不足和病原微生物等刺激，多种炎症因子和炎性介质通常呈现“瀑布式”生成和释放，并迅速浸润、扩散，TNF⁃α、IL⁃1、IL⁃6 等炎症因子会在机体循环中出现并迅速达到最高峰［13，14］。且感染性休克发生后机体感染性标志物水平表现为异常表达，其主要体现在正性、负性急性期蛋白水平异常，其中PCT、CRP 为正性急性期蛋白，PA、TRE 为负性急性期蛋白，其中PCT、CRP 在感染后表达出现持续升高趋势，PA、TRE 在感染后表达出现持续下降趋势［15］。本文研究结果显示，E 组大鼠机体炎症、感染性标志物水平显著降低，此结果说明，乌司他丁联合右美托咪定两者可协同作用，起到抗炎症、抗感染的作用。

综上所述，乌司他丁联合右美托咪定能改善感染性休克大鼠血压、心功能水平，通过降低体内内毒素的含量，调控TNF⁃α、IL⁃1、IL⁃6 表达起到抗炎作用，抑制正性、负性急性期蛋白起到抗感染作用。