郎超

（山西药科职业学院，山西太原 030031）

黄芩，又名山茶根，是唇形科黄芩属多年生草本植物，主要分布于我国东北地区和内蒙古自治区中东部，味苦而寒，清热、抗病毒、消炎和抗氧化等作用显著[1-3]。黄芩药材中含有黄芩苷、黄芩素等多种有效提取物成分。近年来的报道称，黄芩苷除了具有传统抗炎、抗氧化、抗病毒等功效外，还具有较为广泛的抗癌活性[4-6]。本研究选用黄芩苷处理人肝癌细胞HepG2，通过MTT实验检测黄芩苷对肿瘤细胞存活的影响，并使用细胞流式检测、Western Blot实验和实时定量PCR实验，对黄芩苷诱导肿瘤细胞凋亡的促进效应做了初步的探讨。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

黄芩苷（baicalin），95%，溶于DMSO，上海源叶生物科技有限公司；Caspase3、Bcl-2、Bax等抗体试剂，上海碧云天生物技术有限公司；Trizol-RNA提取试剂、q-RTPCR实验相关试剂盒，日本TAKARA公司；DMEM培养基，生工生物工程（上海）股份有限公司；penicillin-streptomycin，日本同仁公司；细胞凋亡检测试剂盒，前尘生物科技有限公司；引物由Invitrogen（上海）合成。

Galaxy 170 S二氧化碳培养箱，德国Eppendorf公司；MX2型微孔板振荡器，韩国FINEPCR公司；Infinite F50型酶标仪，瑞士Tecan公司；TG-16型离心机，上海卢湘仪离心机仪器有限公司；BD FACSCalliburⅡ型流式细胞仪，美国BD公司；PowerPac HC型电泳仪、CFX Connect型荧光定量PCR仪，美国Bio-Rad公司。

1.2 细胞培养

MCF-7（人类乳腺癌上皮细胞株）于DMEM培养基中培养，加入10% FBS及1% penicillin-streptomycin，培养条件：5% CO2、37 ℃、55%湿度。

1.3 MTT实验

选取适量处于对数生长期的HepG2细胞，接种在96孔板中，细胞充分贴壁后，分别加入200 μL含20 μmol/L、40 μmol/L、60 μmol/L、80 μmol/L、100 μmol/L黄芩苷的培养基，每组5个复孔，对照为PBS，在5% CO2、37 ℃、55%湿度条件下培养24 h后取出；更换100 μL新鲜培养基，再加入20 μL MTT（5.0 mg/mL），继续培养约4 h后终止细胞培养。……