林小枫 ， 刘梅雪 ， 袁玮艺 ， 张琼歌 ， 朱 磊 ， 杜 谦

(1.西北农林科技大学动物医学院 ， 陕西 杨凌 712100 ； 2.杨凌金海生物技术有限公司 ， 陕西 杨凌 712100)

猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2，PCV2)是目前严重危害养猪业的一种重要病原。PCV2感染能抑制机体免疫，导致猪圆环病毒病综合征(Porcine circovirus associated disease，PCVAD)，且PCV2在猪群中的持续存在，给养猪业造成了巨大的损失[1]。PCV2的单链环状DNA基因组包含2个主要的编码框(Open reading frame，ORF)，即ORF1和ORF2。可根据ORF2基因序列的差异将PCV2分为8个不同的基因型，其中PCV2a、PCV2b和PCV2d是主要的流行基因型[2]。猪群中最早流行PCV2a基因型，然后转变为PCV2b，目前正缓慢转变为PCV2d[3-4]。虽然有报道称，目前市场上销售的基于PCV2a基因型毒株的疫苗对于PCV2d基因型毒株的保护效果与PCV2a基因型毒株相当，但临床仍存在已接种PCV2a基因型毒株疫苗的猪发生PCVAD，因此PCV2临床毒株可能突破疫苗免疫保护[5]。原核生物素连接酶(Prokaryotic biotin ligase，BirA)是原核生物调控生物素合成的酶，生物素受体肽(Biotin acceptor peptide，BAP)是一种广泛使用的15 aa标签肽，其可被插入目的蛋白，使目的蛋白被BirA高效识别并标记生物素[6]。利用BirA-BAP标记系统获得生物素化PCV2d毒株可为后续进一步研究PCV2d感染突破疫苗免疫保护的具体机制提供材料。

本试验从陕西咸阳某临床发病猪场采集17头仔猪的血清、脾脏和淋巴结等组织样本，PCR检测发现其中5头仔猪为PCV2阳性，经测序发现1头仔猪感染了PCV2d基因型毒株。将PCV2d基因组orf2序列中226～246 bp替换为BAP编码序列后，环化并转染稳定表达BirA的PK15细胞，经连续传代5次后，获得生物素标记的重组PCV2d基因型毒株，本结果将为后续开展PCV2d基因型毒株免疫逃避机制研究提供有效的工具。……