刘彦彦，申 茹

(1.铜仁职业技术学院药学院，贵州 铜仁 554300；2.惠州卫生职业技术学院药学与检验学院，广东 惠州 516000)

达原饮作为中医经典方剂，出自吴又可的《瘟疫论》，具有开达膜原，辟秽化浊的功效[1-2]，是治疗瘟疫初起邪伏膜原的代表方，由槟榔、厚朴、草果、知母、白芍、黄芩、甘草7 味药组成，常用于发热、小儿厌食、胃肠病、慢性肾功能衰竭、新型冠状病毒肺炎等多种疾病[3-8]。

目前关于达原饮含量测定的文献报道主要针对达原饮中黄芩苷、芍药苷、芒果苷等有效成分[9-10]，为了有效控制达原饮的质量，本研究采用UPLC法测定达原饮臣药厚朴中和厚朴酚与厚朴酚的含量。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

LC-2040C 3D Plus高效液相色谱仪(日本岛津公司)；色谱甲醇、色谱乙腈(美国Tedia公司)。和厚朴酚、厚朴酚对照品(批号：20200918)均购自北京北方伟业计量技术研究院，纯度大于98%。

达原饮方剂中7种中药材均购于民生医药集团有限责任公司，经我校中药教研室梁玉勇教授鉴定为正品，具体见表1。

表1 中药材信息表

1.2 试验方法

1.2.1 提取工艺优化

以乙醇为提取溶剂，采用正交试验优选达原饮方剂中药材提取工艺。根据前期单因素考察基础上[11]，按照正交表L9(34)对提取工艺进行优选，因素与水平见表2。

表2 因素与水平表

1.2.2 色谱条件

Shim-pack GIST C18色谱柱(50 mm ×2.1 mm，2 μm)，流动相：0.1%磷酸水溶液(A)-乙腈(B)(50：50，V/V)等度洗脱，检测波长230 nm，体积流速为0.3 ml/min，进样量1 μl；对照品、达原饮样品的色谱图见图1。

图1 混合对照品溶液(A)和样品溶液(B)的色谱图

1.2.3 线性关系考察

精密吸取不同浓度的混合对照品溶液，按色谱条件测定峰面积。以峰面积为纵坐标，进样浓度为横坐标绘制标准曲线，结果见表3。

表3 线性关系考察结果

1.2.4 溶液的制备

1.2.4.1 对照品溶液的制备

精密称定和厚朴酚540 μg、厚朴酚 560 μg，用80%乙醇溶解并定容至10 ml量瓶中，得混合对照品溶液。

1.2.4.2 供试品溶液的制备

称取达原饮中7种中药材粗粉(槟榔6 g、厚朴3 g、草果仁1.5 g、甘草1.5 g、白芍3 g、黄芩3 g、知母3 g)，加入20倍量80%乙醇加热回流提取3次，每次1 h，将滤液合并，定容，摇匀，即得。

1.2.5 方法学考察

依据《中国药典》通则9101分析方法验证指导原则中方法进行检测。

2 结果

2.1 正交试验结果与分析

由表4结果可知，极差影响最大的D因素，最小的是B因素，A因素与C因素中K2和K3、均相差不到5%，考虑到提取成本和提取时间，最终优化出达原饮药材提取工艺为A2B3C2D3，即处方量药材加入20倍量80%乙醇回流提取3次，每次1 h。

表4 正交试验设计及结果

2.2 验证试验

准确称定达原饮处方量药材3份，按优选出的最佳提取工艺进行验证，结果见表5。

表5 验证试验结果

由表5验证试验结果表明，和厚朴酚含量均值为0.94 %，厚朴酚含量均值为2.02 %，2种有效成分的RSD值均小于3 %，证明该提取工艺稳定可行，重现性好。

2.3 方法学考察

结果显示2种有效成分精密度、重复性、稳定性RSD均小于3 %，平均加样回收率分别为102.4 %和98.8 %，RSD值分别为2.36 %和1.78 %，符合药典要求，见表6。

表6 准确度试验结果

3 讨论与结论

达原饮是《瘟疫论》中的治疫名方，治疗发热、流行性感冒已有确证疗效，尤其在新型冠状病毒肺炎早期患者出现的发热，并伴有食欲差、甚至恶心、大便稀溏等消化道症状具有很好的疗效[12]。厚朴作为方中的臣药，具有行气消积、燥湿除满的功效，发挥着非常重要的作用。厚朴的主要的活性成分是和厚朴酚与厚朴酚[13]，也是作为《中国药典》中作为指控成分[14]。本实验通过UPLC法对其2种成分进行含量测定，可有效控制达原饮的质量。

UPLC较HPLC法检测速度快，灵敏度高。传统HPLC测定厚朴中有效成分需要30 min 左右完成[13]，采用 UPLC法测定，在 6 min内完成对达原饮中和厚朴酚和厚朴酚的含量测定。

在预实验中考察了三种提取方法，通过对达原饮中和厚朴酚与厚朴酚的含量，确定最佳提取方法是回流提取法，该方法操作简单，工艺可行，并通过单因素及正交试验优选出达原饮中和厚朴酚与厚朴酚的最佳提取工艺。