林鸷，赵本进，何锡忠，朱永军，彭丽英*

(1 上海市农业科学院畜牧兽医研究所，上海 201106；2 上海佳牧生物制品有限公司，上海 201403)

悬浮培养细胞在国际上发展较快，已趋向成熟，是生物制品生产中应用较普遍的一种生产工艺模式。与转瓶培养细胞相比，该工艺具有操作简单、省时、成本低等优点。根据前期对猪伪狂犬病病毒株的细胞适应性的研究结果，用猪源传代细胞系——猪睾丸细胞(swine testis cell，ST 细胞)繁殖猪伪狂犬病病毒株来制备疫苗效果最佳。本文对ST 细胞进行悬浮培养驯化、传代，并对全悬浮STHN-XF 细胞的F1、F5、F26、F36 代进行纯净性和核型分析。

1 试验材料

1.1 全悬浮STHN-XF 细胞

全悬浮STHN-XF 细胞为上海市农业科学院畜牧兽医研究所课题组自行驯化和传代的悬浮细胞株。

1.2 培养基

培养细胞用的VirusPro ST-S 细胞无血清培养基购自上海源培生物科技股份有限公司。无菌检验用的硫乙醇盐流体培养基、胰酪大豆胨液体培养基均购自中海生物技术有限公司。支原体检验用的液体培养基和固体培养基均购自中海生物技术有限公司。

1.3 荧光抗体检测试剂盒

牛病毒性腹泻病毒、猪圆环病毒2 型及猪瘟病毒的间接荧光检测试剂盒购自中海生物技术有限公司。

1.4 细胞核型分析试剂

秋水仙碱、0.075 M 氯化钾溶液、Carnoy固定液[V(甲醇)∶V(冰醋酸)=3 ∶1]，现用现配。

1.5 其他

其他化学试剂、液氮罐、低温冰箱、37 ℃的CO2培养箱、25 ℃的CO2培养箱、摇床、生物反应器及其他仪器设备由上海市农业科学院畜牧兽医研究所提供。

2 试验方法

2.1 细胞传代

将悬浮驯化好的STHN-XF 细胞37 ℃悬浮培养48 h，细胞密度达到3×106个/mL 以上进行传代，连续传代至F36 代，其中将F7～F16 代细胞作为生产细胞进行冻存。……