辛丽欣，张 欣，殷 博，甄 涛

(黑龙江省科学院微生物研究所，哈尔滨 150010)

枯草芽孢杆菌(BacillusSubtilis)是一种产芽孢的革兰氏阳性细菌，在自然环境中广泛存在。该菌株是常见的植物内生细菌，主要分布在植物的根和茎部，具有分布范围广[1-2]、分离纯化简单、抗菌活性和抗逆好等特点，目前广泛应用在黄瓜、玉米等主要经济农作物上[3-4]，具有较好的生物防治效果。通过响应面法获得枯草芽孢杆菌SW01的最佳培养基配方[5]，显著提高了芽孢数量，为生防菌剂的大面积推广奠定了科学理论基础[6-7]。

1 材料与方法

1.1 试验材料与设备

菌种：枯草芽孢杆菌(BacillusSubtilis)SW01由本验室分离保存。

培养基：葡萄糖1%、牛肉膏0.5%、蛋白胨0.5%、氯化钠0.5%、琼脂2%，pH 7.0，121℃灭菌30 min。

试剂：葡萄糖、玉米粉、豆饼粉、酵母粉、硫酸镁、磷酸二氢钾、硫酸锰，硫酸铵、碳酸钙等试剂均为分析纯，购自天津化工。

1.2 方法

菌株活化：将-80℃保存的SW01菌株接种到平板培养基中，30℃倒置培养24 h。

筛选显著因子：采用Plackett-Burman方法筛选显著因子，对培养基的组分进行单因素水平试验，对影响因子选取高低两个水平。

响应面法优化培养基配方：利用Design8.0简体软件，通过Plackett-Burman设计法，筛选培养基中影响芽孢数量的显著因子，结合响应面分析法，确定最佳培养基配方，通过模型验证实验结果。

2 结果与分析

2.1 培养基配方优化

通过Plackett-Burman法设计初始发酵培养基组分中的9个影响因子[8]，分别为玉米粉、CaCO3、(NH4)2SO4、葡萄糖、K2HPO4、酵母粉、MgSO4·7H2O、MnSO4·H2O、豆饼粉，每个因素取高低两个水平，结果见表1～表3。从实验结果和方差分析获得排序，显著顺序为玉米粉>豆饼粉>葡萄糖>酵母粉>K2HPO4>MgSO4·7H2O>MnSO4>CaCO3>(NH4)2SO4，(NH4)2SO4影响最不显著。