孙 超，郭献山，张 莹，吴苏豫，熊承云（新乡市中心医院内分泌科，河南 新乡 453000）

糖尿病的发病率逐年增长，其发生发展与胰岛β细胞功能障碍和凋亡密切相关[1-2]，抑制或减轻胰岛β细胞损伤对糖尿病的治疗尤为重要。黄连素，亦称小檗碱，是从中药黄连中分离的一种季铵生物碱，具有多种药理活性[3]。有报道[4]称其可能通过上调胰腺组织中Pdx-1蛋白表达，显著降低2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗，改善胰腺组织病理性损伤。miR-1224-3p属于微小RNA（microRNA，miRNA），参与调控细胞凋亡、炎症反应及氧化应激，与多种疾病的发生发展密切相关。有报道称，miR-1224-3p在1型糖尿病肾病患者尿液中表达升高[5]，但其对胰岛β细胞损伤的影响还未知。本研究以小鼠胰岛β细胞MIN6为研究对象，探究黄连素和miR-1224-3p对过氧化氢（H2O2）诱导的MIN6细胞凋亡及炎性因子表达的影响及黄连素能否调控miR-1224-3p来影响MIN6细胞凋亡及炎性因子表达，为日后将黄连素用于临床治疗糖尿病提供药理学基础。

1 材料与方法

1.1 实验材料

小鼠胰岛β细胞MIN6（中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心）；DMEM培养基、Annexin V-FITC/PI试剂盒、CCK-8试剂盒和二喹啉甲酸（BCA）蛋白检测试剂盒（均购自北京索莱宝科技有限公司）；胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）（浙江天杭生物科技股份有限公司）；LipofectamineTM2000试剂盒（美国Invitrogen公司）；miR-1224-3p抑制剂（anti-miR-1224-3p）、抑制剂阴性对照序列（antimiR-NC）、miR-1224-3p模拟物（mimics）、模拟对照序列（miR-NC）及引物序列（均购自上海生工生物工程有限公司）；IL-6、IL-1β和TNF-α试剂盒（南京建成生物工程研究所）；鼠抗人Bcl-2和Bax抗体（美国Santa Cruz公司）；miRNA抽提试剂盒、逆转录试剂盒及PCR试剂盒（大连宝生物工程有限公司）。……