熊云刚 赵 露 姜 森

贵州航天医院病理科 (贵州 遵义 563000)

宫颈癌是妇科常见恶性肿瘤，位居妇科肿瘤第二位，发病率仅次于乳腺癌，随着现代女性工作压力增加和生活方式改变，发病率逐年上升，且逐渐年轻化[1-2]。宫颈上皮内瘤变(CIN)是癌前病变，分为三级，Ⅰ级属于可逆性，Ⅱ级和Ⅲ级为不可逆，存在癌变可能，故需尽早分辨两类疾病，及时给予相应诊治，以便对该病变的进一步恶化进行有效控制[3]。Survivin蛋白是与凋亡控制有关的蛋白，通常在胚胎中表达，主要通过信号传导调节细胞周期或抑制细胞凋亡，通常在恶性肿瘤中具有较高表达，例如在卵巢癌组织[4]、结直肠癌[5]中均具有高表达，但在宫颈病变中表达情况还有待进一步探索；mmp-9是蛋白水解酶家族的一员，在多种肿瘤细胞侵袭、转移、增殖中起到重要调控作用[6]，但目前关于其与宫颈癌、宫颈上皮内瘤组织关系研究报道较少，基于此，本文深入探索了Survivin、mmp-9在CIN、宫颈癌中表达性以及相关性。报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料回顾性分析在2016年3月至2021年3月收集的31例宫颈癌患者(观察组)、49例CIN患者(对照组)临床资料，观察组年龄31～58岁，平均年龄(44.46±6.45)岁，体重51～69kg，平均体重(58.71±4.32)kg；对照组年龄30～59岁，平均年龄(44.51±6.33)岁，体重50～70kg，平均体重(58.63±4.41)kg。两组比较年龄、体重等一般资料无统计学差异性(P＞0.05)。而对照组CIN患者中，Ⅰ级11例，Ⅱ级20例，Ⅲ级18例；观察组：临床分期：Ⅰ期10例，Ⅱ期10例，Ⅲ期11例；病理分级：Ⅰ级9例，Ⅱ级13例，Ⅲ级9例；间质浸润：深肌层19例，浅肌层12例；组织分型：腺癌5例，鳞癌26例。纳入标准：术前未接受化疗、放疗；临床资料齐全；近6个月内无非甾体消炎药应用史。

1.2 研究方法免疫组化法：标本经固定、脱水、浸蜡、包埋，切成3-4μm的切片，经二甲苯脱蜡，梯度酒精水化，采用链霉菌抗生素蛋白-过氧化物酶连结法(S-P法)，3%过氧化氢灭活内源性过氧化物酶，高温高压抗原修复，一抗4℃孵育过夜，滴加生物素标记的二抗37℃孵育30min，磷酸缓冲盐溶液(PBS)冲洗，二氨基联苯胺法(DAB)显色，苏木素复染，酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。

1.3 染色结果判断由两位经验丰富的病理医师进行双盲阅片，Survivin阳性表达为细胞质和细胞核呈棕黄色颗粒；mmp-9阳性表达为细胞质呈现棕黄色颗粒，采用半定量结果判断，分别对镜下的阳性细胞百分比和染色强度给予评分。(1)阳性着色细胞数：每个切片观察5个高倍视野(×200)，计数阳性细胞百分比，阳性细胞数＜5%，为0分；5%～25%，为1分；26%～50%，为2分；51%～75%，为3分；＞75%，为4分。(2)阳性细胞着色强度：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。(3)两者计分相乘即为染色积分，用染色积分反映蛋白的相对表达量。0分为阴性，1～4分为弱阳性，5～8分为阳性，9～12分为强阳性。

1.4 统计学方法采用SPSS 20.0统计学软件处理，相关性采用Pearsom或Spearman法分析，计数资料比较采用χ2检验，用(%)表示，计量资料以(χ-±s)表示，多组间比较采用单因素方差分析，事后两两比较采用LSD-t检验，检验水准0.05。

2 结 果

2.1 比较两组阳性率观察组Survivin、mmp-9阳性率高于对照组(P＜0.05)，CIN分级中，Ⅲ级mmp-9、Survivin阳性率高于CINⅠ级(P＜0.05)，见表1。

2.2 比较不同病理特征宫颈癌组织中阳性表达情况不同临床分期、病理分级、淋巴结转移情况宫颈癌患者比较Survivin、mmp-9阳性率存在差异(P＜0.05)，不同间质浸润、组织分型的阳性率差异无统计学意义。(P＞0.05)，见表2。

2.3 分析不同类型mmp-9、Survivin染色积分宫颈癌mmp-9、Survivin染色积分高于对照组(P＜0.05)，CIN Ⅲ级mmp-9、Survivin染色积分高于CINⅠ级(P＜0.05)，见表3。

2.4 相关性分析经Spearman法分析，不同病变类型与Survivin、mmp-9染色积分呈正相关性；经Pearson法分析，Survivin染色积分与mmp-9染色积分呈正相关性，见表4。

表4 分析不同病变类型和各项指标染色积分相关性

3 讨 论

经流行病学调查[7]，每年约有45万女性患有宫颈病变，其中宫颈癌、CIN均是女性好发类型。在对宫颈疾病的探索过程中，有学者发现，乳头瘤病毒为宫颈病变常见的诱因之一，当乳头瘤病毒与宿主DNA结合后，可对基因转录过程进行调节，诱导宿主细胞恶性增殖，从而诱发宫颈病变[8]。CIN与宫颈癌病因、临床症状均有相似之处，极易造成混淆，但其治疗方式及预后却有差异，为了辨别两类病变，还需合理选择一项筛查方式，从而为疾病诊疗提供科学依据[9]。

有研究表明[10]，Survivin蛋白为小分子量的凋亡抑制蛋白，可对细胞的凋亡进行抑制，还可对有丝分裂的过程进行调节，促使细胞增殖，与肿瘤的发生、发展及预后情况具有密切关联。本研究中，宫颈癌中Survivin蛋白分子的阳性率和染色积分相较于对照组有增高趋势，且有统计学差异，说明了Survivin蛋白的表达与宫颈病变进展呈逐渐增强趋势，也提示了通过对宫颈癌细胞的凋亡进行抑制，可促进细胞增殖[11-12]。周庆红[13]学者在研究中显示，Survivin蛋白的表达在正常宫颈间及CINⅠ级对比无显著差异，故单方面筛查Survivin蛋白仍可造成误差，对此需高度重视CIN与正常宫颈的差别，对其进行积极治疗并随访。MMPs为锌离子依赖肽链内切酶，可降解细胞外基质中的成分，从而作用肿瘤侵袭转移的过程[14]。mmp-9为MMPs中分子量最大的酶，但该酶需在活化的作用下才可发挥作用。本研究表明，观察组MMP-9的阳性率及染色积分高于对照组，说明mmp-9与机体恶性肿瘤转移的潜能及预后情况具有密切关联。同时CIN Ⅲ级mmp-9的表达量高于CINⅠ级，说明mmp-9参与了宫颈病变形成早期过程，且在非致死性、致死性子宫颈癌细胞中亦有高表达性，也进一步说明了MMP-9蛋白水解酶在宫颈癌、宫颈病变形成中有着重要的意义。

同时，本研究显示，不同临床分期、病理分级、淋巴结转移情况宫颈癌患者比较Survivin、mmp-9阳性率存在差异性(P＜0.05)，不同间质浸润、组织分型的阳性率差异无统计学意义(P＞0.05)，表明Survivin的表达水平与宫颈癌的淋巴结转移及临床分期、病理分级情况具有密切关联，其肿瘤临床分期越高，则Survivin的表达阳性率也有提高，且淋巴结转移组阳性的表达率比无淋巴结转移组更高，也说明了Survivin的表达与宫颈癌的发展具有密切关系，也可在一定程度上反映宫颈癌的恶性程度。经Spearman法分析，不同病变类型与Survivin、mmp-9相对表达量呈正相关性，提示了MMP-9可作为宫颈癌转移的重要指标，可对宫颈癌的预后情况进行预测[15]。此外。经Pearson法分析，Survivin相对表达量与mmp-9相对表达量呈正相关性，推测可能是，一方面，过度表达的Survivin，可促进PGE2合成，刺激MMP-9分泌；另一方面，Survivin的过度表达还可诱导mmp-9表达上调，增强对BM、ECM讲解，促进宫颈癌浸润侵袭，故推测Survivin、mmp-9表达存在一定关系，但具体作用机制还需进一步实验证实[16]。

综上所述，宫颈癌及宫颈上皮内瘤患者经免疫组化法评估后，Survivin和mmp-9表达量随着病变的严重程度可呈升高趋势，且能够在一定程度上反映病情进展情况，推测可作为反映宫颈癌前病变、宫颈癌预后标志物。