董双涛，霍乃蕊

（1.山西药科职业学院宣传统战部，山西 太原 030031；2.山西农业大学动物科学学院，山西 太谷 030801）

0 引言

对聚合草蛋白质含量进行测定，比较不同的蛋白提取方法；并进行蛋白的氨基酸组成分析和氨基酸评分，为聚合草的深加工奠定基础。

1 材料

聚合草叶采于山西农业大学；紫花苜蓿采于山西农业大学牧站。

2 试验方法

2.1 聚合草干叶和鲜叶蛋白质含量的测定

蛋白质采用GB5009.5-2010第一法凯氏定氮法测定。

2.2 聚合草叶蛋白的提取

分别采用：TCA-丙酮沉淀法，SDS法及酚法，三种方法提取。

2.3 蛋白定量

采用Bradford（1976）方法，考马斯亮蓝G-250蛋白显色液组成：0.01%（w/v）考马斯亮蓝G-250，4.7%（w/v）乙醇，8.5%（w/v）磷酸。标准蛋白以牛血清白蛋制作标准曲线，待分析蛋白溶液的0.1mL，10倍稀释，加5.0mL考马斯亮蓝G-250显色液，混匀，放置5min，测其吸光度值，依标准曲线计算待分析蛋白液中蛋白的浓度。

2.4 蛋白质提取率及蛋白提取物的纯度计算

2.5 聚合草叶蛋白氨基酸组分分析

2.5.1 氨基酸组成测定方法

蛋白质氨基酸组分分析采用GB/T 5009.124-2003标准，最低检出限为10pmol。由于聚合草叶片中蛋白质含量丰富，适于用本法进行测定。

样品处理：①色氨酸以4.2mol NaOH水解；②胱氨酸用过甲酸氧化法处理测定；③其余氨基酸以6mol HCl水解测定。

2.5.2 氨基酸评价方法

AAS 是指被测蛋白质每克氮（或蛋白质）中氨基酸量（mg）除以理想模式或参考蛋白质中每克氮（或蛋白质）中氨基酸量（mg）[1]。AAS测定按FAO[2]的方法进行，AAS值代表了待测氨基酸与FAO/WHO模式中相应氨基酸的接近程度[1]。

EAAI值显示待测蛋白质中所有必需氨基酸与标准蛋白质必需氨基酸的接近程度[1]。……