杨宁宁，张 倩，易继海，王 震*，陈创夫*

(1.石河子大学 动物科技学院 人兽共患病重点实验室，新疆 石河子 832000；2.西部地区高发人兽共患传染性疾病防治协同创新中心，新疆 石河子 832000；3.新疆农垦科学院 省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室，新疆 石河子832000)

自噬是一种广泛存在于真核细胞中高度保守的细胞内降解过程[1]。通过自噬作用，细胞质里的物质被自噬体双层膜结构所包裹，通过与溶酶体融合形成自噬溶酶体，胞质里的物质就被溶酶体所降解[2]。按照细胞内底物运送至溶酶体的方式的差异可将自噬分为3类，即：微自噬、巨自噬和分子伴侣介导的自噬，一般情况下“巨自噬”即常称为自噬[3]。自噬相关基因(autophagy-related gene,Atg)是细胞自噬的重要调节点[4-5]。目前仅有微管相关蛋白轻链 3 (microtubule-associated protein light chain 3，LC3)参与哺乳动物细胞自噬发生的整个过程，因此可作为细胞自噬过程中的重要标志之一[6-8]。 LC3在细胞内存在两种形式，即：LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ，由于 LC3-Ⅱ参与自噬体膜形成的始终，因此，细胞中 LC3-Ⅱ的含量在一定程度上反映了该细胞的自噬程度[9-11]。

研究发现，胞内病原微生物(细菌、病毒等)可通过自噬调控其在胞内的复制过程，一方面，自噬可以降解杀灭入侵的病原微生物，清除胞内病原体，维持机体的自身稳定；另一方面，自噬可被一些病原微生物所利用，促进其对宿主的感染，起到损伤宿主细胞作用[12-16]。本课题组前期的研究表明可以用绿色荧光蛋白表达质粒 pWal-GFP电转化布鲁菌(Brucella),再将转化后的pWal-GFP-Brucella侵染已经标记溶酶体红色荧光探针(Lyso-Tracker Red)的RAW264.7细胞，用激光共聚焦显微镜观察布鲁菌和溶酶体共定位，由于没有稳定的细胞系，导致操作比较繁琐，费工费时，且很难开展后续工作[17]。……