淡水鱼中的孔雀石绿和隐性孔雀石绿的快速提取和检测
2022-06-13谢湘武刘柳韦媛媛粟晖传杰杰
谢湘武,刘柳*,韦媛媛,粟晖,传杰杰
1.广西糖资源绿色加工重点实验室,广西科技大学(柳州 545006);2.广西壮族自治区计量检测研究院(南宁 530007)
孔雀石绿(malachite green,MG;分子式C23H25ClN2),属于三苯基甲烷型的染料,进入人体或动物机体后,很快代谢成毒性更强、更稳定的隐性孔雀石绿(leuco malachite green,LMG;分子式C23H26N2),已被禁止作为抗菌剂、杀虫剂、消毒剂[1]使用在水产养殖业和海产品的运输途中。但由于孔雀石绿抗菌驱虫能力极强,优于抗生素类药品,许多水产业养殖业仍在违规使用,屡禁不止[2-3]。
水产品中LMG、MG的提取方法主要分2步。第一步是溶剂提取。在GB/T 20361—2006《水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量测定的高效液相色谱荧光检测法》[4]和GB/T 19857—2005《水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定》[5]中,均采用乙腈-乙酸铵缓冲液提取残留物,加入二氯甲烷进行液液萃取。有学者[6]采用乙酸乙酯-正己烷-水对鱼肉中的孔雀石绿进行提取,采用侧流层析免疫分析法进行检测,MG最低检出限为1 ng/g。此外,丙酮-环己烷、乙酸乙酯-石油醚、乙腈-二氯甲烷提取体系常用于生物活性物质的提取,但在试验中发现:丙酮-环己烷提取体系易使干扰物质大量富集在提取液难以除去;乙酸乙酯-石油醚体系提取时乳化现象严重,且回收率低;用乙腈-二氯甲烷提取效果最为理想,对分析结果无干扰影响。因此,乙腈对细胞组织具有良好渗透作用和沉淀蛋白的作用,是LMG和MG的最佳提取溶剂[7]。第二步是净化浓缩,现行国家标准和文献大多采用中性或酸性氧化铝固相萃取柱对提取液进行固相萃取净化[8],除去油脂和其他杂质,再用N2吹干或旋转蒸发浓缩[9-10]。……
