贺澳门，徐莎莎，何彦桥，陈晓卫，陈小飞

（塔里木大学农学院/塔里木大学南疆有害生物综合治理兵团重点实验室，新疆阿拉 843300）

1 材料与方法

1.1 供试材料

1.1.1 供试菌种。供试菌株（YALAR-1）分离于新疆阿拉尔市榆叶梅叶斑病病害样品，保存于塔里木大学农业部阿拉尔作物有害生物科学观测试验站。

1.1.2 供试杀菌剂。毒力测定供试药剂及溶剂：97%氟啶胺原药（WP），南京帮诺生物科技有限公司；99%百菌清原药（WP），合肥艾美尔生物药业有限公司；99%甲基硫菌灵（WP），合肥艾美尔生物药业有限公司；99%戊唑醇原药(WP)，合肥艾美尔生物药业有限公司；99%多菌灵原药（WP），合肥艾美尔生物药业有限公司；98.5%利福平原药（WP），湖北九洲康达生物科技有限公司；99%硫酸新霉素（WP），湖北博蓝化工有限公司；99%氯霉素（WP），陕西生物科技有限公司；36%乙酸，天津市致远化学试剂有限公司；无水乙醇，天津市鑫铂特化工有限公司。

田间药效试验供试药剂：500g/L 氟啶胺（SC），陕西华戎凯威生物有限公司；430g/L 戊唑醇（SC），上海升联化工有限公司；75%甲基硫菌灵（WP），陕西亿农高科药业有限公司；500g/L 百菌清（WP）；50%多菌灵（WP），上海升联化工有限公司。

1.2 试验设计

1.2.1 室内毒力测定。采用菌丝生长速率法[4]测定杀菌剂对病原菌的生长抑制作用。在预试验基础上，选取5个浓度梯度。在无菌操作环境下，接种直径为0.5cm 的菌饼置于含药平板上，每个浓度重复3 次，另设不加药剂的培养基为空白对照。于28℃全光照中培养7d。采用十字交叉法测量菌落直径，计算各药剂抑制率并得出EC50 值。

1.2.2 含药培养基的配置。将8 种药剂原药溶于相应溶剂（甲醇、乙醇、乙酸）制成母液（母液浓度为1g/L)，用枪头吸取一定体积的母液加入冷却至50℃左右的PDA培养基中使母液浓度稀释，稀释后PDA 培养基定容成50mL，摇晃使其充分溶解，最终配制成5 个浓度梯度的含药培养基。空白组中加入相应等量的溶剂作为对照[5]，对照也定容至50mL。最终含药平板的浓度梯度为氟啶胺（1、2、4、6、8mg/L）；甲基硫菌灵（5、10、25、35、50mg/L）、百菌清（5、10、25、35、50mg/L）；多菌灵（2、5、10、20、40mg/L）；利福平（200、250、300、350、400mg/L）；硫酸新霉素（25、50、100、200、400mg/L）、氯霉素（25、50、100、200、400mg/L）；戊唑醇（1、2、5、10、20mg/L）。

1.2.3 大田试验。药效试验选择在阿拉尔市榆叶梅绿化带（80°30′E、40°22′N）进行，于榆叶梅叶斑病始发期（2021 年5 月29 日）开始开展药效试验。

选取EC50 值小于100mg/L 的药剂进行田间药效试验。先进行预试验确定药剂稀释区间，将药剂设置为3 个梯度，每个浓度重复3 次，1 组浓度设为1 小区，另设置1 个施用清水的对照。每隔1 周施用1 次药剂，施用药剂时天气晴朗、无沙尘等其他不良气候影响，施药3 次。第3 次施药14d 达到发病盛期后进行调查。

调查方法为各小区每株树选取5 个方位的枝条，调查总叶片数及病叶数，发病叶数与总叶数之比为病害率，由于榆叶梅叶斑病未有病情指数等级，故大田试验防效采用病害率之比进行计算进而得出防效，试验药剂浓度梯度及试验有效含量见表1。

表1 5 种药剂稀释倍数及推荐稀释倍数

1.3 数据处理

采用数据处理软件ⅠBM SPSS Statistics19 进行数据处理分析，计算EC50 值及相关参数，大田试验选用Duncan 氏新复极差法进行差异显著性比较。

相关计算公式：

抑菌率（%）＝（对照菌落纯生长量-处理菌落纯生长量）/对照菌落纯生长量×100[5]

纯生长量=菌落平均直径-菌饼直径

病害率（%）=病叶数/总叶片数×100

防效（%）=（对照病害率-处理病叶率）/对照病叶率×100

2 结果与分析

2.1 8 种杀菌剂对榆叶梅叶斑病的室内毒力测定

2.1.1 药剂对榆叶梅叶斑病病原菌菌丝生长作用。28℃全光照培养7d 后，氟啶胺、戊唑醇、多菌灵的处理对榆叶梅叶斑病病菌菌丝生长均有较高的抑制效果，其表现在随着处理浓度的增加，菌丝的生长速度减弱；甲基硫菌灵、百菌清、利福平抑制效果次之；而硫酸新霉素、氯霉素对菌丝的抑制效果不明显（见图1）。

图1 对菌丝抑制效果较好药剂（a：氟啶胺；b：多菌灵；c：Tebuconazole）

2.1.2 药剂对榆叶梅叶斑病毒力。由表2 可知，氟啶胺、戊唑醇对叶斑病病菌EC50 值最小，毒力最高，分别为0.717mg/L、2.060mg/L；其次为多菌灵、甲基硫菌灵、百菌清，EC50 值分别为9.992mg/L、18.571mg/L、79.357mg/L。而抗生素对病原菌毒力非常小，利福平、硫酸新霉素、氯霉素 EC50 值分别为 318.450mg/L、3301.010mg/L、3847.840mg/L。

表2 8 种药剂对榆叶梅叶斑病病菌的毒力作用

2.2 田间药效试验

2021 年5 月29 日进行第1 次喷雾，后2 次试验时间分别是6 月5 日、6 月12 日，6 月26 日进行病害数据调查。第1 次施药时病害发病率在3%左右，第3 次施药后已出现明显发病症状，调查时发病率较高。由表3可知，500g/L 氟啶胺悬浮剂稀释2000 倍防效较好，为81.75%，其次为430/L 戊唑醇悬浮剂稀释5000 倍液，防效达到75.25%。多菌灵、百菌清、甲基硫菌灵对榆叶梅叶斑病均具有一定的效果，3 种药剂防效在35%～65%。

表3 5 种药剂有效含量及各浓度防效（%）

3 讨论与结论

3.1 结论

供试8 种药剂中氟啶胺、戊唑醇药剂对榆叶梅叶斑病病菌抑制效果最好，多菌灵、甲基硫菌灵、百菌清药剂对病菌抑制效果次之，而利福平、硫酸新霉素、氯霉素对病菌的抑制效果不明显。田间试验结果表明，500g/L 氟啶胺悬浮剂、430g/L 戊唑醇悬浮剂防治效果最佳，分别为81.75%和75.25%。50%多菌灵粉剂、75%甲基硫菌灵粉剂、500g/L 百菌清粉剂防治效果次之，防效为35%～65%。

3.2 讨论

采用菌丝生长速率法测定了8 种药剂对榆叶梅叶斑病菌的室内毒力，结果表明，8 种药剂中的5 种杀菌剂均对病原菌显示出了一定的抑制作用，其中氟啶胺、戊唑醇毒力最高，其次是多菌灵、甲基硫菌灵和百菌清。为了结合生物防治开展病害防控，本研究试图从3 种常用抗生素（利福平、硫酸新霉素、氯霉素）中筛选出能有效抑制病菌的药剂，但是毒力测定表明，这3 种抗生素对病菌具有较弱抑制作用。因此，病害防控过程中应避免使用这3 种抗生素药剂，以免造成药液浪费和环境污染。

链格孢属真菌是有丝分裂孢子真菌类群丝孢纲丝孢目，是引起植物病害的重要真菌类群之一。生产上链格孢属真菌病害多为叶斑类病害，防治该类病害的生物农药普遍存在见效慢、稳定性差等问题[5]。榆叶梅叶斑病也是由链格孢侵染所致，同样存在运用抗生素类药剂防治病害效果不明显的问题，因此当前仍然以杀菌剂为主要防治药剂[6]。为了有效控制病害的发生与发展，开展病害的综合防控是必由之路，今后还应大力开展其它类型生物农药的筛选研究[7]。

保护性杀菌剂与内吸性杀菌剂的作用方式各不相同，保护性杀菌剂一般不具有内吸性，对于已经侵染的病斑无治疗作用。而内吸性杀菌具有内吸传导作用，能够对侵染成功的病菌形成抑制作用，因此具有一定治疗效果。因此，在开展病害防治时，应结合两者的优点，适时施药，轮换使用。本研究表明，氟啶胺、戊唑醇防治榆叶梅叶斑病效果最好，可以作为生产中开展病害防治的理想药剂。但是长期大量施用单一农药，容易使病菌产生抗药性，若将2 种药剂科学混配，又能有效延缓抗药性的产生。本研究中氟啶胺、戊唑醇与其它的药剂混配是否具有增效作用，能否在生产中提高防效，还有待进一步研究。

本试验中氟啶胺、百菌清均为保护性杀菌剂，应该在病害发生之前喷药保护树体，而其它药剂均为内吸性杀菌剂，应该在发病初期喷雾防治[8]。试验作为一个年度榆叶梅叶斑病防控试验，田间试验可能受年份及区域环境因素影响，后续可扩大研究区域，选择具有代表性的环境验证试验等，以降低气象因素及环境条件对试验数据及防效的影响[9-10]。