罗赤峰，姚 焰，何 丹，马 敏，彭 静，陈远刚

心房颤动是临床上较常见的一种持续性心律失常病症类型，其主要临床特征为心房高频率兴奋，进而引起心房收缩表现不同步及心室兴奋表现不规则等。该疾病具有发病率高、病情复杂、难治愈等特点[1-3]。据有关报道显示，近年来心房颤动发病率逐年升高，且到目前为止全球范围内有近4 000万人患有心房颤动，严重危害病人的身心健康并影响病人正常生活。长链非编码RNA H19(long non-coding RNA H19，LncRNA H19)是一种自身不编码蛋白的长链RNA分子，可以通过调节核糖的方式控制人体基因的表达[4-5]。相关研究证实，LncRNA H19在肿瘤等多种疾病的发生、发展中起着重要作用[6-7]。心肌重构是心肌对长期血管压力或容量负荷过重等刺激的适应性变化，也是许多心血管疾病的最后通路[8]。有研究显示，心力衰竭和病理性心肌肥厚病人LncRNA H19表达升高，进而影响心肌纤维化过程[9]。目前，血浆LncRNA H19与心房颤动的发病机制及其与心肌重构的关系尚不完全清楚。基于此，本研究拟通过检测心房颤动病人血浆LncRNA H19的表达情况，并探讨其表达水平与心房颤动病人心肌重构的关系，以期为临床诊断及治疗心肌重构提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年6月—2019年2月在本院心内科确诊并住院治疗的心房颤动病人112例为心房颤动组，其中男69例，女43例，年龄45～68(59.03±3.24)岁。选取同期在本院进行常规体检未患有心房颤动的人群107名为对照组，其中男60名，女47名，年龄43～69(58.79±3.11)岁。心房颤动组及对照组性别、年龄、体质指数(BMI)及吸烟占比比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，而心房颤动组糖尿病及高血压占比明显高于对照组(P<0.05)。详见表1。该研究经本院道德伦理委员会批准通过，所有样品采集病人及家属知情并签署同意书，且符合世界医学大会《赫尔辛基宣言》。

表1 两组一般资料比较

1.2 心房颤动组纳入标准 ①符合《心房颤动病人管理指南》中制定的心房颤动相关诊断标准[10]；②入院前2个月内未服用过相关药物进行治疗者；③病人及家属选择在本院接受治疗者；④临床资料齐全者。

1.3 排除标准 ①同时患有心律失常等疾病者；②同时患有严重自身免疫疾病者；③临床资料不全者。

1.4 主要试剂与仪器 总RNA提取试剂盒(货号：20310)，购自北京甘棠飞华生物科技有限公司；逆转录试剂盒(货号：AORT-0020)，购自上海伯易生物科技有限公司；实时荧光定量PCR仪(型号：StepOne TM)，购自美国应用生物系统公司；LncRNA H19及内参GAPDH引物，由上海杏园瑞民生物工程有限公司合成；彩色多普勒超声心动图仪(型号：Sonos-1000)，购自美国HP公司；其他大部分化学药品均购自上海康鹏科技股份有限公司。

1.5 研究方法

1.5.1 样品采集及保存 于清晨抽取所有研究对象空腹静脉血5 mL，放入枸橼酸钠抗凝试管中，3 000 r/min离心10 min后收集血浆，并置于-80 ℃冰箱中保存备用。

1.5.2 血浆LncRNA H19表达水平检测 采用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time PCR，qRT-PCR)检测血浆LncRNA H19水平。取待测血浆，使用RNA提取试剂盒提取总RNA，经逆转录得到cDNA。以逆转录合成的cDNA为模板，进行qRT-PCR检测。PCR反应体系共10 μL，上下游引物各0.2 μL。聚合酶链式反应(PCR)的反应条件为：95 ℃，2 min；95 ℃，25 s；60 ℃，30 s；72 ℃，20 s。共40个循环。血浆LncRNA H19及内参GAPDH的上下游引物序列见表2。采用2-△△CT法计算血浆LncRNA H19相对表达量，每个反应重复3次取平均值。

表2 引物序列

1.5.3 心肌重构相关指标检测 应用探头频率为2～4 MHz的彩色多普勒超声心动图仪对所有研究对象进行超声检查，测定病人的左室射血分数(left ventricular ejection fractions，LVEF)、左房内径(left atrium diameter，LAD)、右房内径(right atrium diameter，RAD)水平，并根据公式计算左室质量指数(left ventricular mass index，LVMI)。

2 结 果

2.1 两组血浆LncRNA H19表达水平比较 心房颤动组血浆LncRNA H19表达水平明显高于对照组(P<0.05)。详见表3。

表3 两组血浆LncRNA H19表达水平比较(±s)

2.2 两组心肌重构相关指标比较 心房颤动组LVMI、LAD及RAD水平明显高于对照组(P<0.05)，LVEF水平明显低于对照组(P<0.05)。详见表4。

表4 两组心肌重构相关指标比较(±s)

2.3 血浆LncRNA H19与心肌重构相关指标的相关性分析 Pearson法分析结果显示，心房颤动病人血浆LncRNA H19表达水平与LVMI及LAD表达水平呈正相关(r=0.483，P<0.05；r=0.496，P<0.05)，与LVEF表达水平呈负相关(r=-0.507，P<0.05)，与RAD表达水平无明显相关性(r=0.147，P>0.05)。详见图1～图3。

图1 心房颤动病人血浆LncRNA H19与LVEF的相关性分析

图2 心房颤动病人血浆LncRNA H19与LVMI的相关性分析

图3 心房颤动病人血浆LncRNA H19与LAD的相关性分析

2.4 心房颤动发生的危险因素分析 以心房颤动疾病发生为因变量(否=0，是=1)，血浆LncRNA H19、LVEF、LVMI及LAD为自变量，采用Logistic回归分析，结果显示：血浆LncRNA H19、LVMI及LAD水平高是心房颤动发生的独立危险因素，LVEF水平高为心房颤动发生的保护性因素。详见表5。

表5 心房颤动发生的危险因素分析

3 讨 论

心房颤动是一种临床较常见的顽固性心脏类疾病。病人常表现为持续性或长期阵发性心律失常，主要因心房的不规则且快速激活，从而引起不协调收缩。心房颤动发病时常导致体内血流瘀滞、血管出现高凝状态等，易造成心房形成血栓，最终出现脑卒中、心肌梗死等心血管并发症[11-13]。流行病学研究显示，我国心房颤动的发生率约为1%，且随着人口老龄化的加剧呈逐年上升的趋势，严重影响人们的健康及生活质量，且给病人家庭造成巨大的经济负担。然而，目前对心房颤动的病因及具体的发病机制尚不完全清楚，因此，对其发病理机制进行深入研究，以寻找新的疾病标志物并研究其与心肌重构的关系具有重要的临床意义。

长链非编码RNAs(long non-coding RNAs，LncRNAs)是一类不具有蛋白质编码功能且长度>200个核苷酸的RNA分子，其基因在人类基因组中约占98%。大量研究表明，LncRNAs在生物体内具有非常广泛的生物学功能，参与多种生物学机制，可通过某些特定方式控制基因的表达，并在多种疾病的发生和发展中起着重要作用[14]。有研究证实，LncRNAs在心脏及心血管疾病中发挥重要作用。LncRNA H19是人类最早被鉴定的一种印迹基因，长度为2.3 kb，位于人类染色体11p15.5上。研究表明，LncRNA H19与心血管等多种疾病的发生发展有关[15]。张博方等[16]研究发现，LncRNA H19在多种心血管疾病的发生及发展中起着重要作用，其可能作为心血管疾病治疗的新靶点。本研究结果显示，心房颤动组血浆LncRNA H19表达水平明显高于对照组，提示血浆LncRNA H19可能参与心房颤动的发展进程。

心肌重构即心肌结构发生改变，主要作用包括心肌细胞重构和细胞外基质重构两个部分。其主要作用是维持心脏的结构、完整性及其机械特性。心肌重构的主要特点是胶原细胞异常增加、心肌肥大及电生理发生改变等[17]。研究显示，提高动物体内LncRNA H19表达水平，可促使体内自噬基因-7表达，进而激活自噬机制，以达到保护心肌的作用，减少心肌梗死面积并增强心功能[16]。本研究结果显示，心房颤动组LVMI、LAD及RAD水平明显高于对照组， LVEF值明显低于对照组，提示心房颤动病人心肌发生重构。心房颤动病人血浆LncRNA H19表达水平与LVMI及LAD呈正相关，与LVEF表达水平呈负相关。此外，Logistic回归分析结果显示，血浆LncRNA H19、LVMI及LAD水平高是影响心房颤动疾病发生的独立危险因素，对血浆LncRNA H19表达水平的监测可为疾病评估提供更充分的临床依据。

综上所述，LncRNA H19在心房颤动病人血浆中的表达水平明显升高，且与心肌重构密切相关，提示血浆LncRNA H19可作为心房颤动病情评估的潜在生物学指标。但本研究因纳入例数偏少可能影响结果，存在一定偏移，为提高研究精确性，后期应在大量样本基础上进行深入探究。