李锦瑞，袁 勋，王志刚，杜之渝*

(1.重庆医科大学附属第二医院眼科，重庆 400010；2.重庆医科大学生物医学工程学院超声医学工程重点实验室，重庆 400016；3.重庆医科大学超声分子影像重庆市重点实验室，重庆 400010)

葡萄膜黑色素瘤(uveal melanoma， UM)是成人最常见的眼科恶性肿瘤，目前常用影像学检查方法包括超声、MRI、CT及光学成像等[1]。多模态成像可为诊断UM提供更多信息[2]；光热联合光动力可显著提高治疗UM效果。本研究尝试制备可用于一体化诊疗的超声/MRI/光学成像对比剂，并观察其多模态成像及体外联合治疗UM的效果。

1 材料与方法

1.1 材料 美国Sigma-Aldrich公司单宁酸(tannic acid， TA)及Ce6，Alfa公司六水三氯化铁(FeCl3·6H2O)，碧云天生物技术有限公司 4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole， DAPI)、RPMI 1640培养基及活性氧检测试剂盒，普诺赛生命科技有限公司胎牛血清及C918细胞系(UM细胞)，东仁公司细胞计数试剂盒(cell counting kit-8, CCK-8)，阿拉丁生化科技有限公司磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline, PBS)。

1.2 仪器 声振仪(Sonic & Materials，XL2020)，马尔文粒度仪(Zeta SIZER3000HS)，低温离心机(Eppendorf，5810R)，激光共聚焦显微镜(Nikon A1)，透射电子显微镜(Hitachi，H7600)，紫外-可见光分光光度计(Agilent，Cary3500)，荧光分光光度计(岛津RF-6000)，660 nm激光仪(石头科技)，红外热像仪(Fotric 226)，3.0T MR仪(Siemens，Verio)。Esaote Mylab90超声成像仪，配备10 MHz探头(型号LA523)。

1.3 制备Ce6@TA-Fe纳米粒 取5 mg Ce6溶于1 ml甲醇，声振下将100 μl Ce6溶液加入5 ml双蒸水，再加入浓度分别为40 mg/ml及10 mg/ml的TA及FeCl3·6H2O溶液各100 μl，以声振仪作用3 min(占空比5 s∶5 s)，离心(10 000 rpm，10 min)并洗涤3次，制成Ce6@TA-Fe纳米粒备用。

1.4 纳米粒稳定性实验 将浓度50 μg/ml 的Ce6@TA-Fe分别溶于10 ml H2O、血清和5%葡萄糖溶液，于37℃孵箱中静置3天；以马尔文粒度仪测量3种溶液中的Ce6@TA-Fe粒径及电位。分别将Ce6分散液、TA-Fe(Ⅲ)复合物和Ce6@TA-Fe加入比色皿，以紫外-可见光分光光度计检测其吸光度。……