赵 雨，褚海清，王结鑫，闫昊前，张立明，2，3*

(1.宁夏医科大学 药学院，宁夏 银川 750004；2．宁夏特色中医药现代化工程技术研究中心， 宁夏 银川750004；3．宁夏医科大学 回医药现代化教育部重点实验室，宁夏 银川 750004)

枸杞西洋参软胶囊是由西洋参和枸杞这两味药材经过工艺优化加工制成的一种健康产品，枸杞是一味传统常用药食同源中药材，始载于《神农本草经》，被列为上品，谓之“久服坚筋骨，轻身不老，耐寒暑”[1]。西洋参是五加科草本植物的干燥根[2-3]。

枸杞西洋参软胶囊是以枸杞和西洋参中提取的枸杞多糖和西洋参皂苷为原料制成的中药制剂，含有皂苷、多糖、黄酮等多类化合物，其中人参皂苷是西洋参的主要活性成分，而人参皂苷目前已分离出40多种单体，主要有Rb1、Rb2、Re、Rc等[4]，在前期研究的西洋参皂苷提取分离纯化过程中，经过70%乙醇大孔树脂洗脱，高效液相检测，发现作为西洋参中的主要成分之一的人参皂苷Rb1含量较大。现有研究显示，人参皂苷Rb1在心血管系统、中枢神经系统、免疫调节等方面的应用非常广泛，具有增强学习记忆能力、促进神经递质的释放、保护心肌细胞等药效作用[5-7]。现代人由于工作压力大，生活节奏快，时常出现精力不旺、记忆力下降、易疲劳、睡眠不好等症状，因此，人们也越来越重视养生、温补的重要性。枸杞西洋参软胶囊中的有效成分对人体有延年益寿、减轻疲劳的作用，能够缓解熬夜造成的精力不旺等症状，满足养生的需求。

人参皂苷Rb1的测定方法有薄层色谱扫描法(TLCS)和高效液相梯度洗脱法，较薄层色谱扫描法(TLCS)而言，高效液相法(HPLC)分析结果准确可靠、误差小、重现性良好[8]。本研究采用HPLC首次对枸杞西洋参软胶囊中人参皂苷Rb1的含量进行精密测定，并对检测方法进行耐用性评价，采用专属性、精密度、稳定性、重复性、加样回收率等来考察评价HPLC测定的科学性，为枸杞西洋参软胶囊的进一步研究和质量标准的制定提供科学数据，为中药制剂生产的全程质量监控提供重要依据。

1 材料与方法

1.1 材料

人参皂苷Rb1对照品(批号：Z20S9X70603)；实验中所用乙腈、磷酸均为色谱纯；水为去离子水；其余试剂均为分析纯。枸杞提取物、西洋参提取物均为实验室自制。

1.2 仪器

Agilent 1260高效液相色谱仪(Agilent 1260 VWD检测器、Agilent 1260 自动化进样器、agilent 1260 色谱工作站)；分析天平。

1.3 实验方法

1.3.1 色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液；流速为1 mL/min，检测波长：203 nm；进样量：10 μL；柱温：35 ℃[9]。

1.3.2 溶液制备 (1)对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Rb1对照品2 mg，置于2 mL的量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，即得。

(2)供试品溶液的制备：取枸杞西洋参软胶囊15粒，倾出内容物，混匀，取约2.5 g，精密称定，加乙醚25 mL，振荡混匀，超声(功率为220 W，频率为50 kHz)处理0.5 min，10 000 r/min离心5 min，弃去上层乙醚液，滤渣挥干乙醚，沉淀加水饱和的正丁醇50 mL，称定重量，置水浴中加热回流1.5 h，放冷，再称定重量，用水饱和正丁醇补足减失的重量，摇匀，滤过[10]。精密量取续滤液25 mL，置蒸发皿中，蒸干，残渣加50%甲醇适量使溶解，转移至10 mL的量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，经0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

(3)阴性对照溶液的制备：按处方比例制备缺西洋参皂苷的阴性制剂，再按“1.3.2”项下方法制备阴性对照溶液。

1.4 方法学考察[11]

1.4.1 线性关系考察 精密吸取“1.3.2”项下制备的对照品储备液，用0.22 μm微孔滤膜滤过，分别吸取上述对照品溶液5、8、10、15、20、25 μL进样，记录峰面积和保留时间。以对照品进样量为横坐标(X)、峰面积为纵坐标(Y)制作标准曲线。

1.4.2 专属性实验 分别吸取“1.3.2”项下的对照品溶液、“1.3.2”项下的供试品溶液和“1.3.2”项下的阴性对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，按照色谱条件进样测定。

1.4.3 精密度实验 取“1.3.2”项下制备的对照品溶液，连续进样6次，按照色谱条件进样测定。

1.4.4 稳定性实验 取“1.3.2”项下制备的供试品溶液，在第0、6、12、24、48 h进样，按照色谱条件进样测定，测定峰面积值。

1.4.5 重复性实验 精密取枸杞西洋参软胶囊5份，按照“1.3.2”项下“(2)供试品溶液的制备”方法制备供试品溶液，按照色谱条件进样测定。

1.4.6 加样回收率实验 精密称取枸杞西洋参软胶囊，分别按照表添加各对照品，按照“1.3.2”项下“(2)供试品溶液的制备”方法制备供试品溶液，共9份，按照色谱条件进样测定。

1.5 含量测定

取样品(批号为20200901、20200902、20200 903)，按“1.3.2”项下“(2)供试品溶液的制备”方法制备供试品溶液，分别按“1.3.1”项下色谱条件进样测定，计算含量。

2 结果与分析

2.1 方法学考察

2.1.1 线性关系考察 人参皂苷Rb1标品的线性回归方程为y=276.89x-35.629(R2=0.999 8，n=6)，结果表明在5～25 μL内，人参皂苷Rb1具有良好的线性关系。见表1、图1。

表1 人参皂苷Rb1线性关系考察结果

图1 枸杞西洋参软胶囊中人参皂苷Rb1标准曲线

2.1.2 专属性考察 考察结果显示，阴性对照无干扰，见图2、图3、图4。

图2 供试品溶液液相色谱

2.1.3 精密度考察 取同一样品连续进样6次后，测得人参皂苷Rb1的RSD值为1.52%，表明仪器精密度良好。见表2。

图3 对照品溶液液相色谱

图4 阴性对照溶液液相色谱

表2 精密度实验结果

2.1.4 稳定性考察 在第0、6、12、24、48h进样，测定峰面积值，结果测得人参皂苷Rb1的RSD值为1.81%，表明供试品在48h内稳定性良好。见表3。

表3 稳定性实验结果

2.1.5 重复性考察 取同批次的枸杞西洋参软胶囊5份，按照本研究色谱条件进样测定，结果人参皂苷Rb1的RSD值为2.64%，表明该方法重复性良好。见表4。

表4 重复性实验结果

2.1.6 加样回收率考察 考察结果表明该方法回收率良好。见表5。

表5 加样回收率实验结果

2.2 含量测定结果

3批样品中人参皂苷Rb1含量分别为25.17、25.29、29.18 mg/g。见表6。

表6 3批样品测定结果

3 讨论

本研究选取了以枸杞、西洋参两味药食同源药材制成的延寿抗疲劳保健食品——枸杞西洋参软胶囊。通过前期枸杞西洋参配伍急性毒性及药效学实验，发现枸杞-西洋参配伍参与了机体的免疫调节过程，具有增强免疫、降血脂、常压耐缺氧和抗疲劳等作用，初步证实其对于睡眠不良、易疲劳、免疫力下降、记忆力减退等人群具有缓解作用。

在此基础上，本研究以枸杞西洋参配伍制得的软胶囊为对象，对西洋参中的有效成分人参皂苷Rb1进行了含量测定，以期建立枸杞西洋参软胶囊的定量测定方法。参照2020版《中华人民共和国药典》[12]中“采用加热回流”的方式对西洋参中人参皂苷Rb1进行了提取。本实验首先制备了枸杞西洋参软胶囊内容物，用乙醚除去脂溶性成分，经饱和正丁醇加热回流的处理方法进行样品处理，采用高效液相色谱柱，当流速1 mL/min、乙腈-0.1%磷酸溶液梯度洗脱、柱温35℃时，色谱分离效果较佳，能满足色谱峰分离度>1.5的要求。

本研究参考大量有关西洋参中人参皂苷含量的测定方法[13-14]，经过多次实验，并进行方法学验证。实验结果显示，所建立的含量测定方法符合定量要求，且专属性高，准确性好，方便快捷，可作为枸杞西洋参软胶囊中人参皂苷Rb1含量测定的方法，并为质量标准的建立提供实验前提。