裴美娟，李淑磊，李梦蓝，刘朝阳，宋 娜，王玉飞

鼠疫是由鼠疫耶尔森菌引起的烈性传染病，又称为黑死病，曾发生几次历史大流行，对人类的健康造成巨大的危害。近年来我国时有鼠疫发生的报道，对人民的健康造成威胁。鼠疫起病急、病程短、病死率高，临床症状常表现为发热、淋巴结肿大、出血、咳嗽，呼吸困难等症状，因此进行鼠疫的早期诊断和检测至关重要。目前，鼠疫耶尔森菌常用的实验室检测方法有酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)、聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)、细菌分离培养等。但这些常用的实验室检测方法存在耗时长、操作复杂、检测效率低等缺陷，难以满足现场快速检测的要求。重组酶聚合酶核酸扩增(recombinase polymerase amplification，RPA)是一种等温核酸检测技术，简单快速，配合一个便携式检测设备即可实现现场的检测和判定，这使得在低资源流行环境下的即时检测成为可能。因此本试验建立了一种检测鼠疫耶尔森菌的荧光RPA方法，可特异灵敏地对鼠疫耶尔森菌进行检测，为鼠疫的现场早期检测提供技术保障。

1 材料与方法

1.1 材料 核酸扩增试剂盒(recombinase aided amplification，RAA)(荧光型)购自杭州众测生物科技有限公司；小提质粒试剂盒，感受态DH5α购自北京全式金生物技术有限公司；pUC57购自北京华越洋生物科技有限公司。金黄色葡萄球菌、草绿色链球菌、产气荚膜梭菌、单核李斯特菌、红斑丹毒丝菌、大肠杆菌、沙门氏菌、布鲁氏菌、巴氏杆菌、流感嗜血杆菌等常见细菌的DNA由辽宁省沈阳农业大学动物科学与医学学院人兽共患病预防实验室提供。……