秦卓明 殷若新 马秀丽 高月花 张玉霞 亓立红 黄兵 李玉峰 徐怀英

摘 要：鸡戊型肝炎病毒（禽HEV）是导致鸡肝脏、脾脏肿大综合症（HS）的主要病原，近期在临床可疑病例发生增多。该病以病鸡肝脏、脾脏肿大以及蛋鸡、肉种鸡的产蛋下降、死淘率增加等为主要危害特征。鉴于引起肝脏病变的病因较为复杂，在此做一下鉴别。

关键词：鸡戊型肝炎病毒;感染;鉴别诊断

中图分类号：S858.31 文献标识码：C 文章编号：1673-1085（2022）03-0028-06

肝脾肿大综合症（HS）由禽戊型肝炎病毒感染引起，是一种以开产的蛋鸡和肉种鸡产蛋下降、死淘率逐渐增加为特征的疾病[1，2]。病鸡剖检特征：在腹腔内积有红色腹水、腹部点状出血，肝脏、脾脏肿大。首次描述该病时称为肝脏和脾脏肿大综合征（HS），又称为大肝大脾病（BLS）、出血坏死性肝炎脾脏综合征、出血坏死性肝炎、肝炎-肝出血综合征和坏死性胆管肝炎[3]。在澳大利亚，大肝大脾病（BLS）被公认为是一种在经济上严重危害肉种鸡并导致其产蛋严重下降的疾病。尚未见到人感染禽HEV的报道，不具有公共卫生意义。

1 病因学

1.1 分类

几乎所有的禽戊型肝炎病毒分离株均属于戊型肝炎病毒科。戊型肝炎病毒科分两个属，分别为正肝病毒属（含哺乳动物和禽源戊型肝炎病毒）和副肝病毒属（含有清喉鳟鱼病毒）。在正肝病毒属中，有4个病毒种。其中，A型毒株分别来自人、猪、野猪、鹿、猫鼬、兔子、驼鹿和骆驼;B型毒株分别来自禽类和野鸟;C型毒株分别来自大鼠、澳洲大袋貍、亚洲麝香鼩、雪貂和水貂;D型毒株主要来自蝙蝠。

已经从世界范围流行的鸡HEV毒株中鉴定出了至少四种不同的基因型，具体包括基因1型（澳大利亚）、2型（美国）、3型（欧洲和中国）和4型（中国台湾和匈牙利）。

1.2 形态学

鸡HEV是一种球形、无包膜、系统对称的病毒颗粒，其病毒直径约为32～34 nm，在其表面有杯状凹陷，类似于杯状病毒。

1.3 化学组成

鸡HEV基因组是一个聚腺苷化单股正链RNA，长度为6 654 bp，具有poly（A）尾巴结构，比哺乳动物HEVs短约600 bp。鸟类的HEV基因组由一个短的5’非编码区（NCR）、三个开放阅读框（ORF）和一个3’NCR组成。ORF1位于基因组的5’端，编码非结构蛋白;ORF 2编码免疫原性衣壳蛋白;ORF 3编码一个功能未知的小蛋白质。

1.4 病毒复制

鸡HEV不能在细胞培养中繁殖。在SPF鸡实验感染HEV后，在肝脏中检测到HEV的复制。同时，在一些肝外组织包括结肠、空肠、回肠、十二指肠和盲肠中亦检测到了HEV，这表明鸡HEV复制不仅发生在肝脏，而且在胃肠道组织中也可进行复制。有证据表明， HEV在口服后首先在胃肠道复制，然后到达肝脏，并通过粪便大量排出病毒。

1.5 理化因子

利用氯仿和乙醚处理含有HEV的肝悬液不能灭活病毒，但经56 ℃孵育1 h或37 ℃孵育6 h后，则混悬液失去感染性。利用0.05%Tween20、0.1%NP40和0.05%福尔马林分别处理HEV肝悬液，其感染性可降低1 000倍。粪口传播途径表明，HEV可抵御肠道中的酸性和弱碱性环境而不失活。

1.6 菌株分类

鸡HEV株目前仅有1个血清型，同一基因型分离株的序列同源性较高，如基因2型分离株间约为90%以上。GenBank中的5个鸡HEV分离株ORF2的同源性在98%以上。但不同基因型之间如基因1型、2型和3型的核苷酸序列同源性有一定的差异，一般为82%～83%。如匈牙利和中国台湾的基因4型鸡HEV与已知3个基因型的核苷酸序列同源性仅为82%～87%。从澳大利亚BLS鸡分离出的病毒是HEV变异株，与来自美国和加拿大的2型禽HEV的核苷酸序列同源性仅为80%[4-6]。

1.7 实验室宿主系统

鸡HEV只有通过静脉接种病毒才能在鸡胚中繁殖，而不能通过其他的接种方法进行增殖。研究表明，用来自鸡HEV感染性cDNA克隆的RNA转录子转染莱航公鸡肝癌（LMH）鸡肝细胞系（ATCCCRL-2117），则证实该细胞支持鸡HEV的复制。利用禽HEV的抗血清，采用免疫荧光（IF）法检测转染的LMH细胞中的病毒抗原，发现荧光信号主要分布在细胞质中。但是，病毒并不能在细胞之间传播。

2 流行病学

2.1 发生和分布

1991年在加拿大西部首次报道HS综合征，此后在加拿大东部和美国得到认可。目前，世界上许多国家都曾报道HEV感染。笼养的莱航母鸡、肉种鸡均易感染该病，但肉-蛋兼用品系鸡则很少感染。HEV感染在美国鸡群中属地方性流行。美国大约有71%的鸡群和30%的鸡，其HEV抗体呈阳性。在另一项研究中，有大约45%的蛋鸡，其HEV抗体阳性;有63%的鸡群HEV RNA检测阳性。在西班牙，大约有90%的鸡群和20%～80%的鸡，其禽HEV抗体检测阳性。

中国禽HEV的感染十分普遍。2007年，梁久红等报道我国南方的鸡血清抗体阳性率为3%[7];张璐等2008～2009年对山东、黑龙江和广东三省进行的血清学调查发现健康鸡的血清阳性率为28.5%，患有肝脾肿大综合征的鸡的血清阳性率为43.3 %[8];赵冀楠等2009～2011年对我国多个地区的禽HEV感染情况调查发现，36个鸡场中32个为禽HEV抗体阳性，阳性率为88.9%;4884份鸡血清中，2 262份为阳性，阳性率为46.31%[9]。

2.2 感染宿主

在自然条件下，除鸡外，还发现了一些野生鸟类如小白鹭、普通红隼、红脚猎鹰、画眉鹰也可感染HEV，但野生鸟感染禽HEV是否产生临床症状尚不清楚。在实验条件下，所有日龄的鸡均可通过静脉和口鼻接种途径感染HEV。但是，人工接种HEV不感染哺乳动物。

2.3 传播、携带和媒介

HEV在鸡群之间很容易发生传播[10]。通过口鼻接种SPF鸡均成功复制了HEV感染。粪便可能是病毒传播的主要途径，因为实验性感染鸡的粪便排泄出大量的病毒。在1日龄雏鸟中检测到了禽HEV的病毒RNA，暗示该病可能会垂直传播。尽管从实验感染禽HEV的鸡蛋清中分离到感染的病毒，但仍然缺乏可发生垂直传播的有力证据。气溶胶途径传播禽类HEV不成功。尚未发现传播禽HEV的携带者或媒介。

3 临床症状

大多数禽类HEV感染为亚临床症状，其发病率和死亡率均较低。发生HS综合征的禽类在死亡前通常缺乏明显的临床症状。在该病爆发时，有些鸡场产蛋下降20%以上，而有些鸡场则几乎不受影响。在实验条件下，实验感染的蛋鸡在12周内产蛋下降为10%～30%。肝脾肿大综合征的特征是，在30～72周龄期间，肉种鸡和蛋鸡的死亡率高于正常的死亡率，且发病高峰集中发生在40～50周龄。在发病期间，每周死亡率上升至约0.3%，有可能超过1.0%。在美国中西部的一个商业蛋鸡场，感染鸡从第19周到27周，鸡群产蛋下降了45%，且该鸡群73%的感染鸡HEV RNA检测结果呈阳性。在澳大利亚，鸡大肝大脾病呈现多种临床症状，从亚临床感染到鸡蛋下降20%，且伴随着在3～4周内每周高达1%的死亡率。患病鸡通常冠子和肉垂苍白、精神抑郁、厌食、羽毛脏或肛门有糊状粪便。患病鸡群通常产小蛋、伴有蛋壳薄和颜色差，但种蛋的内部质量、受精率和孵化率并不受影响。

4 病理剖检

4.1 临床剖检

在自然條件下，死亡鸡通常有卵巢退行性病变，腹部积有红色液体，肝、脾肿大。在死亡前，感染鸡通常体况良好，冠子和肉垂苍白，但也有个别鸡体况较差。肝脏通常质脆，有红色或黄色的斑点或褐色的病灶，并可能伴有肝被膜下血肿和表面附着的血凝块[11]。感染鸡的脾脏从轻微病变到严重肿大，有时伴有白色坏死点。

4.2 组织学病变

在显微镜下，肝脏的病变从多灶性出血到广泛性坏死和出血，包括门静脉周围异粒细胞和单核炎症细胞浸润。在门静脉及其周围，常伴有淋巴细胞浸润和少数浆细胞浸润。此外，同质嗜酸性细胞物质、淀粉样蛋白在肝脏间质细胞中的积累和肝细胞的分离也是常见的。在严重的病例中，常常可见到离散性的肉芽肿，并伴有可能形成的门静脉血栓。

利用禽HEV在实验条件下感染SPF鸡，主要病变发生在肝脏。在部分感染鸡身上，出现了肝脏被膜皮下出血，右肝中叶略肿大。在显微镜下，在肝脏切片中观察到了淋巴细胞性外周炎和静脉炎的病灶。静脉接种后10 d（DPI），对鸡的肝脏损伤最严重。其他的肝脏病变如肝细胞坏死、间质淀粉样蛋白和被膜下出血等，亦可在感染鸡观察到。SPF感染禽HEV后，均可在显微镜下观察到其它脏器病变，如脾脏（轻度淋巴样增生）、胸腺（轻度皮质发育不全）、肾（偶尔有轻度淋巴细胞间质性肾炎）和肺脏（轻度淋巴细胞性、异嗜性副支气管和间质性炎症）等病变[12]。

5 发病和免疫机制

5.1 发病机制

目前，禽HEV在鸡体内感染的发病机制尚不清楚。鸟类HEV被认为是通过粪-口途径进入宿主。禽HEV在肝脏中复制后，由肝细胞释放到胆囊，然后通过粪便排出。除肝脏外，在实验性感染鸡的结肠、盲肠、空肠、回肠、十二指肠和盲肠扁桃体中也可检测到复制的HEV。胃肠道组织可能是口服接种鸡HEV后病毒复制的第一个场所，尽管目前对肝脏以外HEV复制所导致鸡的临床症状和病理变化尚不清楚。

5.2 免疫机理

体液抗体在鸡体内的反应大致发生在接种鸡HEV的1～4周，而细胞介导的免疫在机体内的情况尚不清楚。禽HEV不仅在基因方面与哺乳动物HEV相关，而且与哺乳动物在抗原性方面也相关[13]。禽类HEV的衣壳蛋白是免疫性基因，可产生抵御禽类HEV感染的保护性免疫。在禽HEV和哺乳动物HEV之间，其衣壳蛋白中既有相同的抗原表位，又有不同的抗原表位，该结果已得到证实。目前，在禽类HEV衣壳蛋白中，已鉴定出4个公认的抗原结构域（I、II、III、IV）。但是，一项动物攻毒实验结果表明，衣壳蛋白中决定免疫的表位不具有保护性[14]。

6 诊断

6.1 初步诊断

根据临床症状和病理变化可初步诊断，但缺乏特征性的指标。确诊需要依赖实验室检测。因该病肝脏和脾脏肿大，容易与肿瘤病相混淆，可通过组织病理学进行鉴别。

6.2 实验室诊断

对其诊断主要依赖于利用RT-PCR来检测患鸡粪便、胆汁和血清中的病毒RNA[15]或通过ELISA检测抗体，提示过去曾经感染过HEV。

禽HEV在细胞培养中不复制。虽然可以通过静脉接种鸡胚感染，但由于静脉接种技术难度大，利用鸡胚分离病毒并不成功。

6.3 鉴别诊断

6.3.1 肝脏肿瘤性疾病

6.3.1.1 马立克氏病（Marek’s disease， MD） 是鸡最常见的淋巴组织增生性疾病，以危害淋巴系统、神经系统等为特征，在上述部位形成单核细胞浸润和肿瘤。通常在4～18周龄发病，一旦进入产蛋高峰，MD的发病几率就大大降低。病鸡经常伴有瘫痪或劈叉反应，消化道和性腺常有肿瘤，且肝脏肿瘤结节突出表面、质地坚硬而致密。

6.3.1.2 鸡白血病（Avian leucosis， AL） 是一类由禽白血病毒所引起的鸡的多种肿瘤性疫病的总称。在自然条件下，以淋巴白血病最为常见，又称大肝病。通常在鸡开产后发病（大于30周龄），病鸡极度消瘦，肝脾显著肿大，体积可达正常体积的3～4倍，通常伴有法氏囊肿瘤，这也是鸡白血病的重要特征性病变。

6.3.1.3 网状内皮增生症（RE） 是一种由病毒（REV）引起，以禽类（鸡、鸭和野鸡等）免疫抑制、致死性网状内皮瘤、矮小综合征和慢性肿瘤为特征的疫病。病鸡生长发育障碍，个体瘦小，病鸡羽毛发育不整齐和鸡群发育不良，而饲料消耗量不减少。最典型的病鸡是肝脏肿大并呈苍白或大理石样和发生肿瘤。在肿瘤中发现淋巴细胞、网状细胞和浆细胞。混合感染是RE发生的重要原因。

6.3.2 病毒感染引起的非肿瘤性肝脏病变

6.3.2.1 禽流感 包括高致病性禽流感和低致病性禽流感，由正黏病毒引起，多见于冬、春、秋等天气骤变及寒冷季节，对各种日龄鸡均可感染。该病临床症状复杂多变，既可以造成全身内脏性出血，又可造成全身性出血，如肉髯、脚部鳞片等。剖检可见：肝脏肿大、质脆、易破裂、色浅和出血，多色彩，有黄色条纹。胰腺有褐色或白色斑点样出血以及变性的坏死灶，此为特征性病变。

6.3.2.2 鸡包涵体肝炎 由腺病毒引起，主要发生于肉鸡。所有品系的鸡都能感染，商品肉鸡最易感。发病多在3～9周龄之间，但以5周龄的鸡最多见。特征性病变为肝炎，肝色浅质脆、出血，肿大、发黄，表面及切面有出血点或出血斑。

6.3.2.3 鸡心包积液综合征 由I群4型禽腺病毒引起，主要感染3～5周龄的雏鸡。特征性症状是心包腔中有淡黄色、清亮的积液。肝脏肿胀，脂肪变性和有出血点。

6.3.2.4 其它病毒感染 如鸭病毒性肝炎、鸭瘟、鸭呼肠孤等病毒感染。

6.3.3 细菌或真菌感染导致的肝炎、肝周炎和肝脏肿大 大多数细菌或真菌感染均可导致肝脏和脾脏产生各种病变，如大肠杆菌、沙门氏菌（白痢、伤寒、副伤寒等）、巴氏杆菌、空肠弯杆菌、链球菌、结核杆菌、葡萄球菌、螺旋体、支原体、绿脓杆菌、波氏杆菌等细菌以及曲霉菌等真菌感染，均可造成对肝脏、脾脏等内脏器官一定程度的损伤。具体表现为：肝脏肿大、质脆、出血、坏死、肝脏萎缩、肝脏硬化、肉芽肿等，出现肝周炎、心包炎、腹膜炎和气囊炎等。该类疾病的最大特点是：细菌或真菌感染通常是在家禽机体抵抗力低下的情况下发病的，常常可通过培养基分离到病原菌，且利用抗生素治疗，一般效果较好。相反，由病毒性感染所导致的肝脏病变通常无药可治。

6.3.4 寄生虫感染所导致的肝脏病变 组织滴虫病、住白细胞原虫病等寄生虫病可导致肝脏肿大，并出现特征性坏死。以组织滴虫病为例，可导致典型的肝脏和盲肠肿大;盲肠黏膜发炎出血，形成溃疡和经典的栓塞;肝脏出现特征性的坏死灶，肝脏体积增大，表面形成一种圆形或不规则的稍稍凹陷的溃疡灶，溃疡呈淡绿色或淡黄色，边缘少有突起。

6.3.5  霉菌毒素、药物中毒等导致的肝脏病变 霉菌毒素、有害物质、废弃物、毒物等大都需要在肝脏中代谢，因此，上述每一种因子都会影响到肝脏的功能。以霉菌毒素为例，如种鸡食入霉菌毒素，可导致鸡弱雏较多、雏鸡肝脏质脆、贫血等。药物中毒损害最严重的通常是肝臟，如磺胺药中毒、喹乙醇中毒、有机磷中毒等。

6.3.6 营养、环境等因素所导致的肝脏病变 肉鸡腹水、缺氧、热应激、痛风、脂肪肝出血综合征、生物素缺乏、胆碱缺乏、维生素缺乏（VA、VB、VE等）等多种因素可导致家禽肝脏的病变。

可以采取排除法对上述因素进行分析，一一排除，进而发现真正的原因。

7 预防

目前还没有针对禽HEV的有效疫苗，缺乏针对禽类HEV感染的治疗方法。在养鸡场实施严格的生物安全措施可以控制病毒的传播。

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蛋壳颜色与营养含量有关吗？

没有关系！鸡蛋的蛋壳颜色取决于鸡的品种，是受基因控制的，遗传稳定。鸡蛋无论大小或颜色如何，在营养价值上都非常相似。蛋壳颜色只是满足多元化的需求，试验证明蛋壳颜色及深浅与鸡蛋营养成分和品质没有直接联系。市场上鸡蛋主要有四种，褐壳鸡蛋、粉壳鸡蛋、白壳鸡蛋和绿壳鸡蛋，其中褐壳鸡蛋和粉壳鸡蛋在我国占据主要市场（消费习惯）。不同的蛋壳颜色与蛋壳厚度、蛋壳强度有一定的关联性，但是蛋壳颜色的形成机制与蛋黄、蛋白等营养物质的形成机制无相关性，与鸡蛋的营养成分没有必然联系。