刘 静,陈惠荣,郭佳琦,马金海

B淋巴细胞又称骨髓依赖性淋巴细胞，由骨髓中的造血干细胞分化发育而来，在人体内合适环境刺激下增殖分化为浆母细胞及浆细胞，而浆细胞合成和分泌免疫球蛋白，在体液免疫反应中起着至关重要的作用[1]。近十年，有越来越多的实验研究B细胞在体外增殖分化为浆细胞的步骤，但过程繁琐且周期长[2-3]。该研究用3个步骤建立从B细胞增殖分化成浆母细胞和浆细胞的体外模型，这种体外模型有助于对浆母细胞及浆细胞的功能进一步研究，也为研究多发性骨髓瘤一类浆细胞发育不良疾病提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料健康捐献者外周血单个核细胞，用CD19 MicroBeads human Isolation Kit分离B细胞，纯度>95%。接种于24孔板进行细胞培养，分为CD40L对照组及CD40L+CpG组，每孔2 ml培养液,B细胞浓度为1.5×103个/L。标本已获得健康捐赠者知情同意。

1.2 试剂与仪器CpG、白细胞介素(interleukin)-2、IL-4、IL-6、IL-21、干扰素α(interferon-α，IFN-α)、April、抗体CD19-PercP-Cy、CD27-PE/Cy7、CD38-APC、CD24-PE、CD138-N421、CD20-FITC、Fc block、培养液均购自美国Sigma公司；胎牛血清购自美国Hyclone公司；BD LSR Ⅱ流式细胞检测仪购自美国BD公司；超净工作台购自苏州市洁净技术研究所；台式离心机购自上海安亭科学仪器厂；温水浴锅和恒温箱购自上海精宏实验设备有限公司。

1.3 实验方法优化B细胞的增殖和分化。步骤1：B细胞激活，将纯化的B细胞以1.5×103个/L浓度置于24孔板的RPMI1640培养液，10% FBS，以0.002 L/孔培养细胞。加入CD40L(0.05 μg/L)、IL-2(0.05 μg/L)、IL-4(0.05 μg/L)或CD40L(0.05 μg/L)、CpG (0.01 μg/L)、IL-2(0.05 μg/L)、IL-4(0.05 μg/L)培养4 d。步骤2：浆母细胞分化，在培养第4天，收集细胞并用培养液清洗，去除CD40L、CpG，加入细胞因子组合：IL-2(0.05 μg/L)、IL-6(0.05 μg/L)或IL-2(0.05 μg/L)、IL-6(0.05 μg/L)、IL-21(0.05 μg/L)、IFN-α(0.02 μg/L)促进浆细胞分化3 d。步骤3：浆细胞分化，在培养第7天，洗涤细胞，分别以……