刘梦珂，刘世军，梁玉杰，易前名，欧升源，高毅权，孙欢欢

(陕西中医药大学 陕西省中药资源产业化协同创新中心 秦药特色资源研究开发国家重点实验室(培育)陕西省创新药物研究中心，陕西 咸阳 712083)

枣叶为鼠李科植物枣(ZiziphusjujubaMill.)的干燥叶。大枣全国各地广为栽培，且栽培品种甚多[1]。原产于我国，现亚洲、欧洲和美洲也常有栽培。具有清热解毒的功效。临床常用于小儿发热，疮疖，热痱，烂脚，烫火伤[2]。《名医别录》载：“枣叶，散服使人瘦，久即呕吐，揩热痱疮良”。据文献报道，大枣含有三萜类、皂苷类、生物碱类、黄酮类、糖苷类、核苷类、糖类、蛋白质、氨基酸类、维生素类、酰胺类、有机酸类、甾体类等成分[3]。现代药理研究表明，枣叶具有保肝[4]、抑制肥胖[5,6]、降脂[7]、抗氧化[8]等作用。特别是有人发现大枣叶70%乙醇提取物具有减肥作用[5, 6]，这与《名医别录》中的“枣叶，散服使人瘦”相一致。本实验对枣叶的减肥活性成分的提取工艺进行研究，为其后续研究提供基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料

干燥大枣叶(陕西省合阳县)；无水乙醇(安徽安特食品股份有限公司)；蒸馏水。

1.2 仪器与设备

旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)；电热恒温水浴锅(北京科伟永兴仪器有限公司)；电热鼓风干燥箱(上海科恒实业发展有限公司)；循环水式多用真空泵(河南省予华仪器有限公司)；精密天平(深圳市赛德力检测设备有限公司)；圆底烧瓶、冷凝管、量筒、烧杯、布氏漏斗、循环式真空泵、滤纸。

1.3 试验方法

1.3.1 单因素实验 分别以提取时间、提取次数及料液比进行单因素实验，以枣叶浸膏得率作为评价指标。

1.3.1.1 提取时间的确定

取粉碎枣叶50.0 g平均分为五份，用70%的乙醇提取1次，料液比为1:6，分别提取0.5 h、1 h、1.5 h、2 h、2.5 h，合并滤液，进行抽滤定容，按1∶10的比例取滤液于干燥至恒重并称定质量的蒸发皿中，水浴蒸发至干，105℃条件下干燥3 h，置于干燥器中冷却30min，迅速称重，以其浸膏得率作为判断标准。、；浸膏得率(%)=[(m2-m0)n/m1100%

式中：m0蒸发皿重量(g)；m1供试品重量(g)；m2干燥后蒸发皿+样品重量(g)；n=10(定容后滤液提取比例)

1.3.1.2 提取次数的确定

取粉碎枣叶50.0 g平均分为五份，用70%的乙醇提取0.5 h，料液比为1:6，分别提取1次、2次、3次、4次、5次，合并滤液，按照1.3.1.1项下合并滤液后步骤处理。

1.3.1.3 料液比的确定

取粉碎枣叶50.0 g平均分为五份，用70%的乙醇提取0.5 h，提取1次，料液比分别为1∶6、1∶8、1∶10、1∶12、1∶14，合并滤液，按照1.3.1.1项下合并滤液后步骤处理。

1.3.2 正交试验设计 根据单因素实验结果设计正交试验。分别取干燥粉碎枣叶10.0 g(9份)，进行正交试验设计[9]，以提取时间(A)、提取次数(B)、料液比(C)影响因素进行考察，实验因素水平见表1，按正交试验表进行实验。

表1 因素水平

1.3.3 提取路线

干枣叶→揉碎→醇提→抽滤→定容→浓缩→烘干。

1.3.4 浸膏的提取方法 选取干枣叶，去除杂质，揉碎。称取10.0 g后，置于圆底烧瓶中，根据正交设计方法加70%乙醇回流提取，合并滤液，按照1.3.1.1项下合并滤液后步骤处理。

2 结果与讨论

2.1 单因素实验

2.1.1 提取时间对浸膏得率的影响 由图1可知，浸膏得率随着提取时间的增加，出现上升趋势。即枣叶提取时间从0.5 h增加到1.5 h时，浸膏得率从11.13%上升到17.44%；提取时间增加到2 h时，浸膏得率无明显升高；当提取时间增加到2.5 h时，图像逐渐趋于平缓，浸膏得率不再明显增加。从图1中数据可知，枣叶提取时间为2.5 h时，浸膏得率最大，与提取时间为2h的浸膏得率无明显差异。因此，枣叶最佳的提取时间为2 h。

图1 提取时间对浸膏得率的影响

2.1.2 提取次数对浸膏得率的影响 由图2可知，浸膏得率随着提取次数的增加，出现上升趋势。即当枣叶提取次数从1次增加到4次时，浸膏得率从12.46%上升到 28.37%；提取次数上升到5次时，图像逐渐趋于平缓，浸膏得率无明显升高。从图中数据可知，提取次数为5次时，浸膏得率最大，与提取次数为4次的浸膏得率无明显差异。因此，枣叶最佳提取次数为4次。

图2 提取次数对浸膏得率的影响

2.1.3 料液比对浸膏得率的影响 由图3可知，浸膏得率随着料液比的增加，出现上升趋势。即当料液比从1∶6增加到1∶10时，浸膏得率从14.85%上升到 21.61%；料液比上升到1∶14时，图像逐渐趋于平缓，浸膏得率无明显升高。从图中数据可知，料液比为1∶14时，浸膏得率最大，与料液比为1∶10的浸膏得率无明显差异。因此，枣叶最佳的料液比为1∶10。

图3 料液比对浸膏得率的影响

2.2 正交试验结果

由表2和表3数据分析可以看出，对浸膏得率指标影响最大为因素B。以浸膏得率为考察依据来看，可以看出各因素影响得率的主次顺序为B>A>C。因素B的极差最大，是影响浸膏得率的主要因素。

表2 正交试验结果分析

表3 方差分析结果

经方差分析，因素A、B对实验结果有显著影响，因素C影响不显著。结合表2的直观分析，优选工艺为A3B3C3，但考虑到生产中实际情况，节约成本，确定其优选工艺为A3B3C1，即用1:8的料液比先后提取4次，每次2 h。按此提取条件做三批验证实验，结果如表4所示，与正交试验结果基本一致，说明此提取工艺稳定可行。

表4 验证实验结果

3 讨论

3.1 实验结果分析

本实验通过正交试验优选提取时间为2 h，回流次数为4次，料液比为1:8作为大枣叶的最佳提取方法，这为大枣叶减肥活性成分提取工艺的参数确定提供了实验依据，为枣叶相关产品的开发奠定了一定的基础。

3.2 实验意义

本项目研究优选大枣叶中减肥活性成分的提取工艺，使大枣叶资源得到最大化利用，减缓资源浪费和环境污染。另外，选用乙醇提取枣叶中减肥成分，保证了减肥产品的无害性，为绿色健康减肥产品的研发提供依据。

4 结论

本文探究了大枣叶中减肥活性成分的最佳提取工艺，在单因素实验的基础上利用正交试验进行分析。分析结果表明提取次数为4次，提取时间为2 h， 料液比为1:8为最佳提取工艺。 采用最佳提取条件进行验证实验，实际测得枣叶的浸膏得率与预测值误差相对较小，结果合理。本实验可以为开发大枣叶系列减肥产品奠定一定的基础。