隋 鑫 解 朋 黄建敏 高建青 景建敏 魏玲格▲ 吴炜杰 于宏伟

1.河北医科大学第三医院超声医学科，河北石家庄 050051；2.河北医科大学第三医院核医学科，河北石家庄 050051

促甲状腺激素受体抗体（thyrotropin receptor an-tibody，TRAb）阳性率高达80%～100%，不仅对于毒性弥漫性甲状腺肿（Graves 病）的辅助诊断具有重要的价值，而且对于判断Graves 病的活动期及制订停药计划等均具有一定意义[1-3]。TRAb 是一组多克隆抗体，主要包括甲状腺刺激性抗体和甲状腺刺激阻断性抗体，其中甲状腺刺激性抗体是诱发Graves 病的主要致病抗体，通过激活促甲状腺激素（thyroid stimulating hormone，TSH）受体引起甲状腺功能亢进症，而甲状腺刺激阻断性抗体可阻断TSH 与受体结合，与甲状腺功能减退症发生有关[4]。随着医学检验技术的发展，TRAb 检测方法逐渐增多，如放射免疫分析法、电化学发光法（electrochemical luminescence assay，ECLIA）等。由于放射免疫分析法耗时、具有放射性等缺点，目前已经较少使用[5-7]。电化学发光法测定TRAb 已经在科研中广泛应用，但该方法在临床上存在成本较高的缺点，一定程度上限制了其应用。磁微粒化学发光法（chemical luminescence assay，CLIA）具有操作简便、耗时短、成本低等优点，已经在中国广泛使用，但其在测定TRAb 的准确性上，目前缺少相关的研究[8-9]。本实验室将磁微粒化学发光法与电化学发光测定TRAb进行对比分析，探讨磁微粒化学发光法测定血清TRAb的可行性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2020 年11 月至12 月河北医科大学第三医院（以下简称“我院”）内分泌科门诊及住院部送检患者血清样本。纳入标准：①样本容量＞3 ml；②最终诊断明确；③年龄＞18 岁。排除标准：①样本存在溶血、脂血、乳糜血等情况；②高于或低于任意一种方法的检测范围；③补充生物素的患者除外。共纳入118 例，其中女82 例，男36 例；年龄18～80 岁，平均（42.3±17.6）岁。临床诊断原发性甲状腺功能亢进症43 例，其中36 例经甲状腺血清学指标、超声及体征确诊为Graves 病患者，原发性甲状腺功能减退症8 例，桥本氏甲状腺炎9 例，亚急性甲状腺炎4 例，甲状腺结节5 例，甲状腺癌1 例，健康查体20 例及临床诊断非甲状腺疾病者28 例。

1.2 仪器和试剂

将血清样本同时分别采用直接CLIA 和ECLIA两种方法检测TRAb。CLIA：使用深圳新产业Snibe MAGLUMI 4000Plus 磁微粒化学发光免疫分析仪及配套试剂、校准品、质控品。ECLIA：使用德国Roche Cobas e602 电化学发光免疫分析仪及配套试剂、校准品、质控品。实验所需样本容量为50 μl，总体实验时间30 min，CLIA 和ECLIA 定量检测TRAb 的线性范围分别为0.25～40.00 IU/L 和0.3～40.0 IU/L，参考区间分别为＜1.5 IU/L 和＜1.75 IU/L。

1.3 研究方法

1.3.1 一致性评价 依据CLSI EP09-A3[10]文件，对118 例血清样本进行两种方法学一致性评价。

1.3.2 精密度验证 参考CLSI-A3 文件，取低浓度和高浓度血清样本，以CLIA 法，每个水平每天重复测定4 次，连续测定5 d，计算各自测量的均值、标准差及变异系数。判断标准：以室间质评评价界限作为允许总误差（TEa），批内变异系数（CV）＜1/4 TEa，批间CV＜1/3 TEa。

1.3.3 线性范围验证 参考EP6-A 文件，选择一份浓度值在线性范围上限的高值血清样本（H）和一份浓度接近于零值的血清样本（L），将2 份样本按比例5H、4H+1L、3H+2L、2H+3L、1H+4L、5L 混合，以CLIA法检测其浓度，每个样本测定3 次，计算平均值，按照平均斜率法得出回归方程Y=aX+b（Y 为均值，X 为理论值）。判断标准：斜率a 为0.97～1.03 且R2≥0.95 则通过验证。

1.3.4 参考区间验证 参考CLSI C28-A3c 文件，选取健康查体人群20 名，入选标准为促甲状腺激素、三碘甲状腺原氨酸、甲状腺素、游离三碘甲状腺原氨酸、游离甲状腺素、抗甲状腺过氧化物酶抗体、甲状腺球蛋白抗体均正常，以CLIA 法检测TRAb，验证试剂盒给定参考区间的适用性。判断标准：若检测结果≤2 例在参考区间之外，则该参考区间适用；若＞2 例则需要自行建立参考区间。

1.4 统计学方法

采用SPSS 21.0 软件对所得数据进行统计分析。利用散点图及相关系数评价二者之间的相关性，差异性比较采用McNemar 检验。采用MedCalc 15.2 软件进行Bland-Altman 偏差分析。

2 结果

2.1 ECLIA 和CLIA 检测TRAb 的一致性评价

2.1.1 两种方法检测结果相关性 采用CLIA 和ECLIA两种检测系统检测分别测定118 例血清样本的TRAb浓度，ECLIA 为参比方法（X），CLIA 为待评价方法（Y），将检测结果进行直线相关分析，散点图显示两种方法检测的TRAb 数值间存在直线相关性（图1），决定系数R2=0.939，相关系数r=0.969，提示两种检测方法之间呈现较好的相关性。

图1 ECLIA 法与CLIA 法检测TRAb 的散点图

2.1.2 Bland-Altman 偏差分析 ECLIA 与CLIA 检测TRAb 结果在低值区域（0～5 IU/L）一致性良好，95%界值范围为-2.846～3.334 IU/L。随着TRAb 浓度升高，偏差逐渐增大，其中有5.9%（7/118）的点在95%界限范围之外，差值绝对值最高可达11.24 IU/L，即使在一致性界限范围内，差值绝对值最高达3.5 IU/L。见图2。

图2 ECLIA 法和CLIA 法检测TRAb 的Bland-Altman 偏差分析

2.1.3 诊断符合率 本实验室共检测我院门诊及住院送检患者血清样本118 例。两种方法检测结果的阳性符合率为86.84%，阴性符合率为100%，总符合率为95.76%；一致性检验Kappa 值为0.8995（P ＜0.01），阴阳性符合率良好。见表1。

表1 两种方法检测TRAb 阴阳性差异性分析（例）

2.2 CLIA 法性能验证

2.2.1 精密度 随机选取低值和高值血清样本采用CLIA 方法检测其批内和批间精密度CV。见表2。两个水平TRAb 的批内精密度CV 分别为2.68%和0.92%，批间精密度CV 分别为5.70%和1.48%。

表2 CLIA 法检测TRAb 精密度结果（±s）

表2 CLIA 法检测TRAb 精密度结果（±s）

注 CLIA：光化学发光法；TRAb：促甲状腺激素受体抗体

2.2.2 线性范围 选取的低浓度（L）血清样本，浓度值为0.25 IU/L，高浓度（H）血清样本，浓度值为40.0 IU/L。两份血清样本以不同比例混合后用CLIA 法检测。对检测结果与理论结果进行线性分析，拟合后线性方程为Y=1.0134X+0.0439，决定系数R2=0.9987，提示CLIA 检测TRAb 值在0.25～40.00 IU/L 范围内线性良好。

2.3 CLIA 法参考区间验证

20 名健康体检人群样本，TRAb 检测结果均在试剂盒给定的参考区间内，参考区间通过验证。

3 讨论

Graves 病是一种甲状腺激素分泌增多的自身免疫性疾病[11-13]。现已证实TRAb 与Graves 病的病情发生和演变密切相关[14-15]，TRAb 阳性的Graves 病患者停用抗甲状腺药物后复发风险显著高于TRAb 阴性患者，而且TRAb 阳性率与甲状腺激素水平呈正相关[16]。

ECLIA 是临床及科研上目前测定TRAb 的常用方法[17-19]，是基于“生物素-链霉亲和素”系统的方法学可特异并高效地放大检测信号，提高免疫检测的灵敏度。但随着越来越多人群补充生物素而造成外周循环中浓度的上升，一旦使用“生物素-链霉亲和素”系统的免疫检测试剂对这些人群的外周血样本进行检测，样本中高浓度的游离生物素就会干扰链霉亲和素捕获目标分析物的能力，从而造成检测结果的假性升高或者降低[20-22]。而且，ECLIA 的成本偏高，不利于在临床上广泛应用[8-9]。

CLIA 是基于人工合成的有机化合物异鲁米诺为基础的检测方法，异鲁米诺在人血清中不存在，因此不会对试验结果产生干扰。其在测定TRAb 的准确性方面，目前没有相关的研究[23-25]。

本研究共收集血清标本118 例，通过两种方法检测TRAb，相关系数r=0.969，两种方法具有良好的一致性和相关性；而Bland-Altman 偏差分析显示两种方法在低值浓度部分（0～5 IU/L）一致性良好，但随着TRAb 浓度的升高，偏差也逐渐增大；在阴阳性差异性分析中，阳性符合率为86.84%，阴性符合率为100%，总符合率为95.76%，提示两种检测方法总体检验一致性较好。此外，本研究中对CLIA 检测TRAb 的批间、批内精密度、线性范围进行验证，其均符合检测要求。

因此，本研究认为CLIA 和ECLIA 相关性良好，CLIA 可以作为临床上检测血清TRAb 含量的可靠方法。