任霞 管凤雅 陈颖 褚静 刘耀武＊ 王其丰 高贯彪

（1、亳州职业技术学院药学院，产品 质量检验检测研究院，安徽 亳州 236800 2、亳州市沪谯药业有限公司，安徽 亳州 236800）

白芍来源于毛茛科植物芍药（Paeonia Lactiflora Pall.）的干燥根，始载于《神农本草经》，列为中品[1]，通过调研发现，人们根据药材的性状，将药材分为一等、二等和三等3 个等级进行生产和销售。亳州药材大市场和沪谯中药饮片厂均以一等品直径为2.0-2.5 cm，二等品直径为1.5-2.0 cm，三等品直径为1.0-1.5 cm[2]。但本实验仅仅研究二等品白芍软化工艺。白芍气香，味苦、酸，性微寒。具有养血调经、敛阴止汗、柔肝止痛等作用，用于血虚萎黄，月经不调，自汗等功效[3]。白芍中含有芍药苷、羟基芍药苷、芍药花苷、芍药酯苷和苯甲酰芍药苷等，统称为白芍总苷，其中白芍的主要有效成分是芍药苷占总成分的90 %以上[4]。现代药理研究表明，芍药苷具有养血、抗氧化、抗抑郁等作用[5-6]。白芍主产于安徽、浙江等地，多以生长在较高海拔或温带耐寒类为佳[7-10]。

切制是根类药材必须经过的炮制过程，而软化工艺对切制工序影响极大，软化药材素有“七分润，三分泡”的说法[11-12]。2020 年版《中国药典》记载白芍的软化未详细注明[13]。故本实验通过对白芍的浸润温度、浸润时间和闷润时间进行详细的考察。本实验采用UPLC 法，测定芍药苷、芍药内脂苷、没食子酸和苯甲酰芍药苷成分作为定量指标，并结合水溶性浸出物，运用综合加权评分法，为白芍软化规范化生产提供科学依据[14]。

1 实验材料

1.1 仪器

电热鼓风干燥箱(型号：DHG-9101 OA 型，厂家：上海三发科学仪器有限公司)；水分测定仪（型号：MB27，厂家：奥豪斯仪器有限公司）；电子天平（型号：千分之一，上海佑科仪器仪表有限公司）；直线往复式多功能切药机（型号：QYJ300，金赫达机械制造有限公司）；超高效液相色谱仪（型号：UPLC- CLASS PLUS，waters 公司）；华晨高速多功能粉碎机（型号：DFY-600C，浙江省永康市金穗机械制造厂）；数显恒温水浴锅（型号：HH-4 型，常州国字仪器制造有限公司）。

1.2 试剂试药

白芍药材来源于亳州市沪谯药业有限公司，经亳州职业技术学院药学院刘耀武教授鉴定确定为双子叶植物毛茛科植物芍药（Paeonia lactiflora Pall.）的干燥根，二等品白芍直径为1.5-2.0cm。 所用材料如下： 芍药苷（批号110736-202044，厂家：中国食品药品检定研究院）；没食子酸（批号110831-200303，厂家：中国食品药品检定研究院）；苯甲酰芍药苷（批号：17042302，厂家：成都普菲德生物技术有限公司）；芍药内酯苷（批号：39011900，厂家：成都普斯生物科技股份有限公司）；无水乙醇（级别：分析纯，厂家：江苏强盛功能化学股份有限公司）；磷酸（级别：分析纯，厂家：西陇科学股份有限公司）；乙腈（级别：分析纯，厂家：天津四友精细化学品有限公司）。

2 方法和结果

2.1 水分测定

取切制后白芍薄片，粉碎过筛，按照水分测定法（《中国药典》2020 年版四部通则0832 第二法）进行测定，平行测定三份，计算水分，取平均值。《中国药典》2020 年版收载质量标准中规定，干燥后白芍水分不得超过14%。结果表明，白芍水分均符合要求。

2.2 浸出物测定

取白芍粉末，按照水溶性浸出物测定法（《中国药典》2020 年版四部通则2201 热浸法），平行三次，取平均值，得最终结果。

2.3 色谱条件

色谱柱为（2.1×100 nm，1.7 μm）; 流动相乙腈（A）-0.05% 的磷酸溶液（B），按下列程序进行梯度洗脱。洗脱梯度：0～0.5 min，7%～14% A；0.5～3 min，14% A；3～5.5 min，14%～18% A；5.5～6 min，18%～20% A；6～9 min，20%～22% A；9～9.5 min，22%～40% A；9.5～11 min，40%～50%A；11 ～11.5 min，50%～100% A；11.5 ～12 min，100% A；12～12.5 min，100%～7% A；12.5～14 min，7% A；流速为：0.400 mL/min；检测波长：230 nm；柱温：30℃进样量：10 μl。对照品及供试品的色谱图见图1。

图1 UPLC 色谱图：A 白芍样品色谱图B 混合对照品色谱图

2.4 溶液制备

2.4.1 对照品溶液的制备[15]

精密称取对照品芍药苷5.140 mg 、芍药内脂苷15.190 mg、苯甲酰芍药苷6.15 mg、没食子酸7.02 mg 分别置于容量瓶中，加50% 乙醇溶解定容得对照品母液：芍药苷1063.3 μg/mL、芍药内脂苷308.4 μg/mL、苯甲酰芍药苷14.32 μg/mL、没食子酸10.03 μg/mL。

2.4.2 混合对照品溶液制备

精密量取对照品母液芍药苷0.7ml、芍药内脂苷l.2ml、苯甲酰芍药苷0.4ml、没食子酸0.2ml，置于2 mL 量瓶中，加50 %乙醇定溶至刻度线，摇匀，获得混合对照品溶液，对照品溶液的浓度分别为1063.30 μg/mL、308.40 μg/mL、308.40 μg/mL 和10.03 μg/mL。

2.4.3 供试品溶液的制备

取白芍粉末，过四号筛，精密称定白芍粉末各0.100 g，置于5 mL 锥形瓶中，加50 % 的乙醇溶液于锥形瓶中，密塞，超声处理30 min（功率250 W ，频率50 HZ），取出冷却，加50% 的乙醇定溶至刻度线，摇匀，过0.22 μm 微孔滤膜，即得。

2.5 方法学考察

2.5.1 线性关系考察

精密量取混合对照品溶液2、4、6、8、10、12 和16 μl，每个样品进样2 针，按“2.3”项下色谱条件分别进样测定，记录各峰面积，以进样量（μg）为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归，并绘制其标准曲线，结果表明，各标准曲线在线性范围内线性关系良好。芍药苷在0.36～14.32μg范围内、芍药内酯苷在7.71～308.04μg 范围内、苯甲酰芍药苷在26.58～1063.30μg 范围内、没食子酸在0.25～10.03μg范围内，r 均大于0.999，表明，四成分在其范围内线性关系良好。

2.5.2 精密度试验

精密吸取混合对照品溶液2 μl，并重复进样6 次，按“2.3”项下色谱条件测定，计算得芍药苷、芍药内酯苷、苯甲酰芍药苷、没食子酸峰面积的RSD 分别为0.03% 、0.08% 、0.78%、0.08% 其值均小于1.5%，表明该仪器精密度良好。

2.5.3 重复性试验

称取白芍粉末0.100 g，精密称定，平行操作6 次，以“2.4.3”项下制备供试品溶液，进样10 μl，照“2.3”项下色谱条件测定，白芍中芍药苷、芍药内酯苷、苯甲酰芍药苷和没食子酸四成分结果的RSD 值为0.72%、1.20%、1.90%和0.76%，结果表明该方法重复性良好。

2.5.4 稳定性试验

取“2.5.3”项下任意一样品溶液，分别在0、2、4、8、12 和24 h 进样10 μl，按“2.3”项下的色谱条件测定，计算峰面积的RSD 值。结果芍药苷、芍药内酯苷、苯甲酰芍药苷、没食子酸的RSD 值分别0.49%、0.62%、1.41%、1.60%，表明供试品溶液在24 h 内稳定性良好。

2.6 软化工艺单因素考察

总加权评分，利用综合评分值对实验进行分析，综合性评分=芍药苷×20+芍药内酯苷× 20 +苯甲酰芍药苷×20 +没食子酸× 10 +水溶性浸出物含量× 30[16-17]。

2.6.1 浸润时间

取白芍不同条件下各约150g，照表格操作，取出放凉，晾干后进行切薄片，70℃干燥3 h，取出，照“2.4.3”操作，照“2.3”项下色谱方法测定结果，对不同浸润时间各指标进行综合评价，见表1。

表1 白芍的不同浸润时间单因素试验结果

2.6.2 浸润温度

取不同条件下白芍各约150g，照表格操作，取出放凉，晾干后进行切薄片，70℃干燥3 h，取出，照“2.4.3”操作，照“2.3”项下色谱方法测定结果，见表2。

表2 白芍的不同浸润温度单因素试验结果

2.6.3 闷润时间

取不同条件下白芍各约150g，照表格操作，取出放凉，晾干后进行切薄片，70℃干燥3 h，取出，照“2.4.3”操作，照“2.3”项下色谱方法测定结果，见表3。

表3 白芍的不同闷润时间单因素试验结果

3 结果与讨论

3.1 结果

本实验选取了浸润时间、浸润温度、闷润时间和浸出物四种因素来考察白芍三个规格的软化工艺。由以上结果表明，最适宜的软化工艺为：二等品浸润温度为35℃，浸润时间为14h，闷润时间为36h。

3.2 讨论

在浸润时间考察中，发现当浸润时间超过36 h 时，水中有泡沫，检索文献得知泡沫是三萜类化合物产生，且不因加热而消失，故浸润时间不能超过此时间。在浸润温度考察中，当浸润温度大于等于35℃时，水将会变成深褐色，经检索得知是温度过高导致芍药中萜类化合物会发生氧化和重排，因此浸润温度要小于35℃。在闷润时间考察中，当闷润时间不能超过48 h 时，否则会引起霉变或生虫。