郑 烈 闻新丽 段盛蕾

（陕西省中医医院，陕西 西安 710003）

内质网（ER）作为细胞内最大的膜网络结构，具有完成蛋白质的合成及新生肽链的折叠、组装和运输的功能。肠上皮细胞受到病原微生物、炎性因子、缺血缺氧等多种应激因素后可引发内质网应激（ERS）［1-2］。有研究表明，ERS是溃疡性结肠炎（UC）发病的主要原因，过度ERS会损伤肠黏膜屏障，释放大量炎症因子［3-4］。黄芪多糖是从中药黄芪中分离提纯的大分子化合物，具有抗氧化应激、增强免疫功能等药理作用，可通过抑制肠上皮细胞发生ERS，减轻UC大鼠结肠黏膜的炎症反应［5-6］。人结肠癌细胞系HT29细胞与IECs具有相类似的生物学特征且较为容易培养获得，是国际公认的UC炎症细胞模型［7-8］。目前，关于UC通过毒胡萝卜素内酯（Tg）诱导人结肠癌系HT29细胞发生内质网应激引起细胞凋亡的报道较少。PERK/eIF2α通路是内质网应激途径中最常见的细胞凋亡途径［9］，是否通过PERK/eIF2α内质网应激在UC肠上皮细胞损害中发挥关键作用是值得研究的重要方向。因此，本研究探讨黄芪多糖对Tg诱导HT29细胞蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）蛋白及p-eIF2α蛋白表达的影响，从而进一步为黄芪多糖治疗UC提供客观依据。

1 材料与方法

1.1 耗材与仪器 细胞培养瓶、培养板、冻存盒、冻存管（德国Eppendorf公司，产品货号：3102S，11865S），Millipore过滤器（瑞典Medicago公司），精密分析天平仪器，TC20TM全自动细胞计数仪（美国BIO-RAD公司），OLYMPUS显微镜（IX71、BX53型）等。

1.2 主要试剂 McCoys 5A培养基（美国GIBCO公司，货号：A1010）、DMSO（美国GIBCO公司，货号：D7126）、胰蛋白酶（美国GIBCO公司，货号：Y8925），引物合成（上海闪晶生物技术有限公司），BCA蛋白浓度试剂盒（康为世纪生物科技有限公司，批号：P0015L）、RIPA裂解液（上海碧云天生物技术有限公司，批号：P0013B）等。……