刘艳云

摘 要：目的：评定QuEChERS-气相色谱-质谱联用法测定香蕉中苯醚甲环唑残留量的测量不确定度。方法：根据《测量不确定度评定与表示》（JJF 1059.1—2012），参照《食品安全国家标准 植物源性食品中208种农药及其代谢物残留量的测定 气相色谱-质谱联用法》（GB 23200.113—2018）建立QuEChERS-气相色谱-质谱联用法测定香蕉中苯醚甲环唑残留量的测量不确定度评定数学模型，对不确定度来源进行分析和评定。结果：通过对不确定度各分量进行量化和合成，结果显示香蕉样品中苯醚甲环唑残留量为0.055 4 mg/kg，

扩展不确定度为0.008 34 mg/kg（k=2）。结论：本实验不确定度主要来源为苯醚甲环唑各标准溶液的配制和标准曲线的拟合过程，测量重复性引入的不确定度分量相对最小。

关键词：香蕉;苯醚甲环唑;气相色谱-质谱联用法;不确定度

Evaluation of Measurement Uncertainty for Residues Determination of Difenoconazole in Banana by QuEChERS Method Coupled with Gas Chromatography-Mass Spectrometry

LIU Yanyun

（Beihai Institute for Food and Drug Control， Beihai 536000， China）

Abstract： Objective： To evaluate the measurement uncertainty for residues determination of difenoconazole in banana by QuEChERS method coupled with gas chromatography-mass spectrometry. Methods： According to JJF 1059.1—2012，with reference to GB 23200.113—2018 and QuEChERS pretreatment was used， a mathematical model was established for the determination of the uncertainty of difenoconazole in banana by gas chromatography-mass spectrometry， and the sources of the uncertainty components were analyzed and evaluated. Results： By quantifying and synthesizing each component of uncertainty， the results showed that the difenoconazole residues was 0.055 4 mg/kg， and the extended uncertainty was 0.008 34 mg/kg （k=2）. Conclusion： This experiment showed that the preparation of standard solution and curve fitting has a great influence on the accuracy of the results， and the repeatability determination has a smaller influence on the accuracy of the results.

Keywords： banana; difenoconazole; gas chromatography-mass spectrometry; uncertainty

香蕉屬芭蕉科芭蕉属植物，是一种重要的热带经济作物。主产区分布于广西省、云南省、广东省、海南省和福建省，除直接食用外，还被加工成香蕉片、香蕉粉、香蕉浆和香蕉饮料等多种产品[1-3]。广西发挥毗邻东盟优势，在优越的地理位置、土壤和气候的适宜条件及进出口关税优惠政策影响下，香蕉进出口产业发展态势持续向好[4-5]。苯醚甲环唑属于三唑类杀菌剂，常用于香蕉枯萎病、叶斑病等的防治，在使用过程中不可避免的会造成不同程度的药物残

留[6-7]，因此保障香蕉进出口的质量安全尤为重要。

2021年3月3日，我国发布的《食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量》（GB 2763—2021）[8]中明确规定香蕉中苯醚甲环唑最大残留限量为1 mg/kg。香蕉为本实验室日常抽检的果蔬品种，GB 2763—2021规定香蕉中苯醚甲环唑残留量的检测方法有气相色谱-质谱法[9-10]、液相色谱-串联质谱法[11]。本实验室日常采用的检测方法为

GB 23200.113—2018规定的气相色谱-质谱联用法[12]，采用此标准测定果蔬中毒死蜱、联苯菊酯、甲基毒死蜱和苯醚甲环唑残留量的不确定度评定目前也有报道[13-16]。本实验按照《化学分析测量不确定度评定》（JJF 1135—2005）[17]和《测量不确定度评定与表示》（JJF 1059.1—2012）[18]的要求，参照标准GB 23200.113—2018[12]对香蕉中苯醚甲环唑残留量进行测定，使本实验室能更好地满足《检验和校准实验室能力认可准则》（CNAS-CL01：2018）[19]中日常检验工作质量控制的要求。

1 材料与方法

1.1 材料与设备

本实验样品均为香蕉，来源于政府抽检。

试剂：丙酮（色谱纯，Anpel公司）、乙酸乙酯（色谱纯，Fisher公司）、乙腈（分析纯，Anpel公司）;试剂包（4 g MgSO4+1 g NaCl+1 g Na3C6H5O7+

0.5 g C6H6Na2O7，Biocomma公司）。

标准品：苯醚甲环唑标准溶液（100 μg/mL，坛墨质检科技股份有限公司）;环氧七氯（10 mg，纯度99.36%，Dr.ehrenstorfer公司）。

电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）;XH-C旋涡混合器（常州朗越仪器制造有限公司）;ST 40R高速冷冻离心机（Thermo Fisher赛默飞世尔）;TQ 8040 NX气质联用仪（SHIMADZU岛津）。

1.2 实验方法

1.2.1 标准溶液配制

内标环氧七氯标准储备溶液的配制（1.0 mg/mL）：精密称量纯度99.36%的环氧七氯10.07 mg于10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度，摇匀，-20 ℃保存。

内标环氧七氯标准使用溶液的配制（5.0 μg/mL）：精密吸取内标环氧七氯标准储备溶液0.05 mL于

10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度，摇匀，

4 ℃保存。

苯醚甲环唑标准使用溶液的配制（10 μg/mL）：精密吸取苯醚甲环唑标准溶液1.00 mL于10 mL容量瓶中，用丙酮定容至刻度，摇匀，4 ℃保存。

苯醚甲环唑标准曲线溶液的配制：分别精密吸取苯醚甲环唑标准使用溶液0.02 mL、0.04 mL、

0.10 mL、0.20 mL和0.40 mL于10 mL容量瓶中，加入200 μL内标环氧七氯标准使用溶液。用香蕉的空白基质溶液定容，配制苯醚甲环唑标准曲线溶液，浓度分别为0.02 μg/mL、0.04 μg/mL、0.10 μg/mL、0.20 μg/mL和0.40 μg/mL。過0.22 μm微孔滤膜，供气相色谱-质谱联用仪测定。以苯醚甲环唑定量离子峰面积和内标物定量离子峰面积的比值为纵坐标，以苯醚甲环唑质量浓度和内标物质量浓度的比值为横坐标，绘制标准曲线。

1.2.2 样品前处理

称取10 g试样（精确至0.01 g）于50 mL塑料离心管中，加入10 mL乙腈、试剂包及1颗陶瓷均质子，盖上离心管盖，剧烈振荡1 min后4 200 r/min离心5 min。吸取5 mL上清液加到内含900 mg MgSO4及150 mg PSA的15 mL塑料离心管中，涡旋混匀1 min。4 200 r/min离心5 min，准确吸取2 mL上清液于10 mL试管中，40 ℃水浴中氮吹至近干。加入20 μL内标溶液，加入1 mL乙酸乙酯复溶，过0.22 μm微孔滤膜，供气相色谱-质谱联用仪测定。

1.2.3 气相色谱-质谱测定条件

气相色谱条件：色谱柱SH-Rxi-5Sil MS（30 m×

0.25 mm，0.25 μm）;载气：高纯氦（99.999%），控制模式为色谱柱流量，进样方式为不分流进样，进样量为1 μL，流速为1.0 mL/min，吹扫流量为

3.0 mL/min，进样时间为1 min;进样口温度为280 ℃，升温程序：40 ℃（保持1 min），以40 ℃/min升温至120 ℃，以5 ℃/min升温至240 ℃，再以12 ℃/min升温至300 ℃（保持5 min）。

质谱条件：电子轰击源（Electron Ionization，EI）;电子能量70 eV ;离子源温度：200 ℃;接口温度：280 ℃;溶剂延迟时间：7 min;扫描方式：多反应监测模式（Multi Reaction Monitor，MRM）;环氧七氯选择监测离子（m/z）为352.8>253.0，354.8>253.0;苯醚甲环唑选择监测离子（m/z）为323.0>265.0，265.0>202.0。

1.3 数学模型的建立

试样中苯醚甲环唑计算公式为：

   （1）

式中：X-试样中苯醚甲环唑的残留量，mg/kg;C-由标准曲线得出苯醚甲环唑的质量浓度，μg/mL;m-试样的质量，g;V-试样溶液最终定容体积，mL;f-加标试验的回收率，%。

2 结果与分析

2.1 不确定分量的来源分析

本实验采用内标法原理计算，实验过程无需考虑内标溶液配制过程中引入的不确定度，故不确定度来源主要有苯醚甲环唑各标准溶液的配制和标准曲线的拟合、样品的称量及其前处理过程、测量重复性和加标试验回收率。

2.2 不确定度各分量的评定

2.2.1 苯醚甲环唑各标准溶液配制和标准曲线的拟合引入的不确定度urel（C）

（1）标准使用溶液配制过程引入的不确定度urel（C1）。苯醚甲环唑标准溶液证书显示苯醚甲环唑的标准值为100 μg/mL，k=2，扩展不确定度为3%，相对标准不确定度为：

据《移液器检定规程》（JJG 646—2006）[20]，

1 mL移液器的最大允许误差为±1.0%，按均匀分布计算，据不确定度的B类评定，则容量允差引起的体积标准不确定度为。

实验室环境温度在（20±5）℃范围内波动，按均匀分布计算，k=，溶剂丙酮的膨胀系数为1.43×10-3 ℃-1，由实验室环境温度引入的标准不确定度为。

标准使用溶液配制过程中由1 mL移液器引入的合成标准不确定度为：

相对合成标准不确定度为：

据《常用玻璃量器检定规程》（JJG 196—2006） [21]，注意序号上标。检定规程，20 ℃时

10 mL A级容量瓶容量允差为±0.020 mL，假设为均匀分布，据不确定度的B类评定，则容量允差引起的体积标准不确定度为：

实验室环境温度在（20±5）℃范围内波动，按均匀分布计算，k=，溶剂丙酮的膨胀系数为1.43×10-3 ℃-1，由实验室环境温度引入的标准不确定度为。

标准使用溶液配制过程中由10 mL A级容量瓶引入的合成标准不确定度为：

相对合成标准不确定度为：

故标准使用溶液配制过程引入的相对合成不确定度为：

（2）标准曲线溶液配制过程引入的不确定度urel（C2）。标准曲线溶液配制过程中使用到10 mL A级容量瓶，1 mL和0.1 mL刻度吸管，据《常用玻璃量器检定规程》（JJG 196—2006）[21]，不确定度来源主要包括20 ℃时各量器本身的不确定度和实验室环境温度引入的不确定度，如表1所示。故标准曲线溶液配制过程引入的相对合成不确定度为：

（3）标准曲线拟合过程引入的不确定度urel（C3）。本法每个浓度标准溶液测定2次，得到标准曲线方程A=34.852C-0.406 0，r2=0.999 8。标准曲线拟合结果见表2。

对香蕉样品连续测定3次，运用校准曲线对香蕉中苯醚甲环唑进行校准得到平均质量浓度C0=

0.109 μg/mL，由标准曲线拟合过程引入的不确定度计算公式为：

（2）

（3）

式中：S-回归方程残差的标准偏差;b-标准曲线斜率;p-葡萄样品测定次数;n-标准溶液测定次

数;C0-香蕉样品中苯醚甲环唑含量，μg/mL;Ci-标准溶液浓度，μg/mL;-标准溶液平均浓度，μg/mL。

则标准曲线拟合过程引入的不确定度为：

故苯醚甲環唑各标准溶液配制引入的不确定度为。

2.2.2 样品的称量及其前处理过程引入的相对标准不确定度urel（S）

（1）样品称样量引入的不确定度u（S1）。由万分之一天平称取香蕉样品10 g，据天平检定证书规定，万分之一天平的允许误差为±0.5 mg，按均匀分布计算，k=3，则由样品的称样量引入的相对标准不确定度为。

（2）样品制备过程引入的不确定度u（S2）。样品制备过程中用到10 mL、1 mL移液器。移液器不确定度来源主要由容量允差、测量重复性和实验室环境温度效应引入，按均匀分布计算，据《移液器检定规程》（JJG 646—2006）[20]，各部分引入的不确定度如表3所示。

故样品制备过程引入的相对合成不确定度为：

。

则样品的称量及其前处理过程引入的不确定度为。

2.2.3 测量重复性引入的不确定度urel（P）

连续对香蕉样品测定6次，测定结果Xi分别为0.054 5 mg/kg、0.053 5 mg/kg、0.055 0 mg/kg、

0.055 0 mg/kg、0.056 5 mg/kg和0.057 5 mg/kg，测量平

均值为0.055 4 mg/kg。测量重复性引入的不确定度为A类不确定度，故由测量重复性引入的不确定度为：

2.2.4 加标试验的回收率引入的不确定度urel（f）

香蕉前处理过程中可能导致苯醚甲环唑损失，以致样品中加入的苯醚甲环唑不能100%进入仪器测定中。称取空白香蕉样品6份，每份均添加

10 μg/mL苯醚甲环唑标准使用溶液0.05 mL，按照2.2.2步骤进行处理，每份进样2次，6份结果回收率为96.7%～103.9%，由加标试验的回收率引入的不确定度为：

2.3 合成标准不确定度及扩展不确定度

香蕉中苯醚甲环唑残留量测定的相对合成不确定度为：

据《化学分析测量不确定度评定》（JJF 1135—2005）[17]，当置信概率P=95%时，取扩展因子k=2，则香蕉样品中苯醚甲环唑残留量的合成标准不确定度为：

计算其扩展不确定度为U=u（X）×k=0.004 17×2=

0.008 34 mg/kg，香蕉样品中苯醚甲环唑残留量的检测结果为（0.055 4±0.008 34）mg/kg，k=2。

3 结论

本实验依据标准GB 23200.113—2018[12]对香蕉中苯醚甲环唑残留量进行测定，在实验过程中，通过对不确定度来源的分析与各分量的评定，结果显示苯醚甲环唑标准溶液的配制和标准曲线的拟合过程引入的不确定度分量>加标试验回收率引入的不确定度分量>样品的称量及其前处理过程引入的不确定度分量>测量重复性引入的不确定度分量。故在日常检验活动中，须对移液管和容量瓶等玻璃量器进行定期检定校准，严格要求实验人员按实验操作规程使用各玻璃量器和仪器设备，以此来减小实验过程中产生的不确定度，从而使检测结果准确性得到进一步提高。

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