唐碧蓉 黄敬春 石星亨 唐赵强 曾艳红 陈丽欣 卓林娟 符文耀 王会娟 蒋淑荣

（1 广东蔚徕实验室科技发展有限公司 广东湛江 524000；2 广东科诚实验室装备有限公司 广东湛江 524000；3 农本科技（湛江）有限公司 广东湛江 524000）

糖肽是一类寡糖与多肽相结合的大分子化合物，糖肽在如糖肽类抗生素和抗肿瘤疫苗的糖类药物研发中有着十分重要的应用。糖肽合成难度较大［1-2］，国内多以灵芝、云芝、纳豆菌、人参等原料进行提取，成本较高［3-7］；国外多以猪胃黏膜或猪十二指肠为原料进行提取，成本相对低廉。广东省年出栏生猪3 300万头、年消费生猪5 000万头，是生猪生产和消费的大省，具备制造糖肽的物质基础。目前，国内因糖肽提取效率不高，多为进口，因此，有必要对硫酸糖肽生产工艺进行优化。本研究以猪十二指肠为原料，采用均匀设计法对提取温度、时间、pH值进行优化，以期改进国内糖肽提取工艺。

1 材料与方法

1.1 材料

猪十二指肠；丙酮（莱阳经济技术开发区精细化工厂）；氢氧化钠溶液；醋酸溶液；氯化钠；胰蛋白酶。

1.2 方法

1.2.1 均匀实验设计

根据预试验，选定提取温度（X1）70～100 ℃、时间（X）210～40 min、pH值（X）3为8～10，以粗品产量为指标，运用王玉方“均匀设计3.00软件”，采用用U6*（64）均匀设计表设计实验。

1.2.2 糖肽提取

选取冰冻的猪十二指肠500 g绞碎成糜状，置于烧杯中，加入500 mL水，按表1方案进行碱解，然后用80%醋酸调节pH值至4.7左右，冷却。纱布过滤，向滤液加入0.5倍体积的丙酮，离心（3 000 r/min、15 min）；上清液中加入药液体积4倍量的丙酮，分级沉淀，沉淀物用丙酮脱水2次。……