师亚玲，韩佃刚，董 俊，叶玲玲，李凌枫，陈朝林，信吉阁，艾 军

（1.云南农业大学，云南昆明 650201；2.昆明海关技术 中心，云南昆明 650200）

小反刍兽疫（peste des petits ruminants，PPR）是由小反刍兽疫病毒（peste des petits ruminants virus，PPRV）引起的严重传染病[1]，主要感染山羊、绵羊和野生小反刍动物等[2]。该病在世界范围内备受重视，被世界动物卫生组织（OIE）列为须通报动物疫病[3-4]，在我国被列为一类动物疫病[5]。

PPRV 属于副黏病毒科麻疹病毒属，是不分节段的单股负链RNA 病毒，只有一个血清型[6]。该病毒基因组共编码6 种结构蛋白，依次为核衣壳蛋白（N）、磷蛋白（P）、基质蛋白（M）、融合蛋白（F）、血凝蛋白（H）和大蛋白（L）[7-9]。其中N 蛋白是主要结构蛋白，可通过自我组装成核衣壳粒子，与P 蛋白和L 蛋白协同作用调控病毒RNA 转录和复制[10]，是病毒粒子中含量最丰富且免疫原性最强的结构蛋白[11]。PPRV 感染机体可以引起强烈的免疫反应，因此N 蛋白常被作为建立诊断、检测方法的候选抗原[12]。

昆虫杆状病毒表达系统（baculovirus expression vector system，BEVS）是以杆状病毒为载体，以昆虫细胞为受体的高效真核表达系统[13]。该系统可将外源目的基因插入杆状病毒载体中，转染入昆虫细胞对单个蛋白或者蛋白复合体进行高量表达[14]。

昆虫细胞培养常用方式有贴壁培养和悬浮培养。贴壁培养操作简单，所需资金少，便于观察细胞形态变化，是最常用且最稳定的培养方式[15]。摇瓶悬浮培养的操作和培养条件也较为简单，具有病毒产量高、产出周期短、不易被污染等优势[16]。因此本研究选用这两种方式作为重组杆状病毒培养方式。

本课题组前期已开发出基于重组昆虫杆状病毒表达PPRV N 蛋白的ELISA 抗体检测试剂盒。……