才忠民，赵晓勇

（南方医科大学附属花都医院骨科，广东 广州 510800）

骨质疏松症（OP）是一种骨代谢性疾病，常见于中、老年人，也是促进其他骨科疾病恶化的诱因［1］.Wnt/β-catenin信号转导通路在人体普遍存在，Wnt与存在于细胞膜上的相关蛋白受体结合，诱导细胞内β-catenin蛋白进入细胞核，转录共活化因子β-catenin是该信号通路的核心部分和最终目标.NPY是氨基酸组成的一种特异性神经递质，分布于多处的神经系统中，在调节各种基本生理功能中起着至关重要的作用.Y1R是第一个被发现为孤儿受体，位于人类染色体4q31.3-q32上［2］.本研究中应用低氧处理成骨细胞株，构建骨质疏松症体外细胞模型，然后采用Wnt/β-catenin信号转导通路抑制剂DKK1处理，进一步深入分析DKK1对体外骨质疏松症模型的C518、MC3T3-E1成骨细胞株的作用机制和影响结果，为阐明骨质疏松症的发病机制和靶向治疗策略的研究提供了新的方向.

1 材料与方法

1.1 材料

选择C518、MC3T3-E1成骨细胞株，C518细胞株购自上海生命科学院细胞资源中心.MC3T3-E1细胞株购自ATCC.C518细胞的培养液是RPMI 1640，MC3T3-E1细胞的培养液是DMEM/F12.

1.2 研究方法

1.2.1 NPY-Y1基因过表达和沉默

取一半各细胞株，分为：空载体组、空白对照组、NPY-Y1过表达组、NPY-Y1基因沉默组，分别加入特异慢病毒（NPY-Y1-cDNA）和空载慢病毒各20 μL，进行孵育过夜处理.

1.2.2 细胞分组

未予任何处理的C518、MC3T3-E1细胞株为空白对照组（Con组）、NPY-Y1基因沉默组及过表达处理的C518、MC3T3-E1细胞株分为NPY-Y1基因沉默组（sh NPY-Y1组）、NPY-Y1过表达组（NPY-Y1OE组）.

1.2.3 Wnt/β-catenin信号通路抑制剂 DKK1处理细胞和Western blot验证

接种4×105各组细胞于六孔板中，加入含5 μM DKK1（Stem RD，USA）的新鲜培养基，72小时后收……