□张 艳 黄红卫

施氏假单胞菌隶属于假单胞菌科假单胞菌属，是一类具有单极性鞭毛的革兰阴性杆菌，临床上极为罕见[1～3]。近十年来，国内仅报道2例由该菌引起的感染。湘南学院附属医院检验中心微生物室于2019年8月从一例外伤患者伤口脓汁中分离出一株施氏假单胞菌，现报告如下。

一、临床资料

患者，男，30岁。因车祸致右小腿外伤，术后皮肤坏死、胫骨及内固定外露十余天，2019年8月25日转至湘南学院附属医院。既往二十余年前有右下肢烫伤手术史，现遗留广泛肢体瘢痕。入院查体：体温36.6℃，脉搏90次/分，呼吸19次/分，血压110/77mmHg。右腿皮肤组织检查：右小腿上段内侧可见一大小约25*8cm的创面，创缘部分皮肤颜色暗，血运差，部分皮肤颜色发黑，血运无，伤口周围稍红肿，皮温稍高，创面可见部分坏死组织，创口内可见胫骨外露，外露骨质颜色发暗，血运差，同时可见钢板及钢丝外露，创面外侧可见一长约8cm的手术缝合伤口，伤口缘部分皮肤颜色暗，血运差。

实验室检查：红细胞(RBC)3.56X1012/L，血红蛋白(HGB)99g/L，总蛋白(TP)62.8g/L，清蛋白(ALB)32.7g/L，球蛋白(GLB)30.1g/L，血沉及凝血功能未见异常。

图1 患者伤口图

二、仪器与试剂

普通营养琼脂培养基、血琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、梅里埃VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定及药敏分析系统、VITEK MS全自动快速微生物质谱检测系统、ABI3730XL测序仪。

三、分离、培养及鉴定

(一)标本采集。用灭菌生理盐水擦洗伤口表面，用无菌棉拭子采取伤口脓汁分泌物，置于无菌试管内送检。

(二)分离培养。将伤口脓汁分泌物通过平板划线方法接种于血琼脂培养基、普通营养琼脂培养基和弱选择性培养基麦康凯琼脂培养基，37℃恒温需氧培养。24小时后取出平板观察菌落特征。同一平板上可见颜色、形状、大小等性状相同或接近的菌落。经革兰染色，细菌均呈红色杆菌，初步判定为同一种菌。

(三)分纯及生化鉴定。挑取单个菌落于血平板进行分纯培养，后取纯培养物于专用比浊管中调至浓度为0.5麦氏比浊度菌悬液，经Compact VITEK2(AST-GN09)系统对该菌进行种类鉴定和耐药性分析。

(四)质谱鉴定。运用MALDI-TOF原理，由VITEK MS全自动快速微生物质谱检测系统进行鉴定。

(五)基因测序。委托北京睿博兴科生物技术有限公司进行基因测序。

四、结果

该菌经涂片染色为革兰阴性杆菌，无芽孢、无荚膜，有单鞭毛。血平板培养48h后，菌落呈现粗糙、干燥、扁平、皱折、坚韧而粘附平板状。普通平板上，菌落呈现出淡黄色。VITEK2(AST-GN09)鉴定为施氏假单胞菌，药敏试验结果显示该菌对哌拉西林，替卡西林/克拉维酸，第三代头孢菌素，亚胺培南，氮唑烷，去甲沙星，环丙沙星和氨基糖苷敏感，对氨苄西林，阿莫西林/克拉维酸，头孢噻吩，头孢西汀和复方新诺明耐药。VITEK MS质谱鉴定结果为施氏假单胞菌，与VITEK2鉴定结果一致。基因测序结果为施氏假单胞菌，与VITEK2鉴定结果、VITEK MS质谱鉴定结果一致。

图2 血琼脂平板菌落 图3 质谱鉴定结果

图4 基因测序结果

五、讨论

根据伯杰分类手册第1卷，按照rRNA同源性分类，施氏假单胞菌隶属于rRNAI群，与铜绿假单胞菌同属1群。该菌广泛存在于土壤、水、粪便及肥料中，人类呼吸道及泌尿道均可存在。属于条件致病菌，当人体抵抗力降低时可引起感染，主要引起机会感染或医院内感染。该菌临床感染率较低，临床案例研究报道少。文献研究多集中于施氏假单胞菌在农业领域的应用。经检索中国知网(CNKI)、中文生物医学期刊文献数据库(CMCC)、Medline等数据库，仅有2篇关于该菌引起临床感染的报道。2012年，董政等报道了从患者坏死皮肤组织中分离出1例施氏假单胞菌。2016年，王亚炜等报道了烧伤伤口分泌物中一株施氏假单胞菌的分离与鉴定。此次，也从患者伤口脓汁中分离出该菌，提示该菌可存在于自然环境或人体皮肤表面。当机体防御功能减弱，机体免疫力下降时，应重视由该菌引起的临床感染。该菌是否好发于外伤伤口中，引起伤口感染，仍值得进一步探讨。该菌菌落呈粗糙、干燥、扁平、皱折、坚韧而粘附平板状，特征较为典型，培养遇此类菌落时，应高度怀疑此菌，并对病原体进行鉴定。药敏试验结果提示该菌对部分药物耐药明显，提示临床用药应在药敏试验结果指导下进行，临床医生不可单凭经验用药。