胡兆勇 谭 劲 陈 明 杨庆泽 刘艳丽

1.湖南中医药大学医学院解剖实验中心，湖南长沙 410208；2.湖南中医药大学第一附属医院口腔科，湖南长沙 410007；3.湖南中医药大学医学院，湖南长沙 410208

微RNA（microRNA，miRNA）是真核生物中广泛存在的一种长为21～25 个核苷酸的非编码RNA 分子。miRNA 可以通过特异性地结合到mRNA 的3’非翻译区，抑制mRNA 的翻译或直接断裂靶标mRNA。目前已被发现的人类miRNA 超过1400 种，其中miR-21 在肺癌、乳腺癌、口腔癌等的组织中高表达[1-3]。经研究发现其与肿瘤、细胞纤维化的发生发展密切相关。研究表明，miR-21 在口腔黏膜下纤维化组织中高表达[4]，但与口腔黏膜下纤维化癌变机制的关系尚不清楚。基于此，本研究构建口腔黏膜纤维化癌变细胞模型，初步探讨miR-21-5p 的表达情况，并通过生物信息学分析预测miR-21-5p 的靶基因及进行GO、KEGG分析，旨在为进一步研究miR-21-5p 与口腔黏膜下纤维化癌变的作用机制奠定理论依据和实验基础。

1 材料与方法

1.1 材料

大鼠原代口腔黏膜上皮细胞由上海赛百慷生物科技有限公司提供，货号为RAT-iCell-m013，槟榔提取物由深圳润慧生物科技有限公司提供。荧光定量PCR 仪由美国Thermo Quant 公司提供，型号为Studio1，台式冷冻离心机由中国湖南湘仪公司提供，型号为H1650R；电泳仪由中国北京六一公司提供，型号为DYY-2C。

1.2 研究方法

1.2.1 培养细胞 将原代大鼠口腔黏膜上皮细胞按常规方式培养，选取对数期生长的细胞，将细胞悬液浓度调整为105个/ml，接种于12 孔板中，每孔接种400 μl，将12 孔板放在细胞培养箱中静置24 h，待细胞贴壁并达到一定融汇度后，弃掉上清液，磷酸盐缓冲液清洗，分为正常对照组和实验组，每组3 个孔实验组加入50 μg/ml 槟榔提取物诱导，构建口腔黏膜下纤维化癌变细胞模型。……