刘秀娟 吴 豫 邹 鑫 余燕燕 耿燕秋 双 峰

1.解放军联勤保障部队第九〇八医院肾内科，江西南昌 330002；2.解放军联勤保障部队第九〇八医院检验科，江西南昌 330002；3.解放军总医院第三医学中心肾内科，北京 100039；4.解放军联勤保障部队第九〇八医院骨科，江西南昌 330002

他索沙坦是一种血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ，Ang Ⅱ）受体拮抗剂，在临床上用于降低患者血压，消除体内炎症[1]。Toll 样受体4（toll-like receptor 4，TLR4）是介导肾脏炎症及纤维化的重要调节因子，Ang Ⅱ能够促进肾小管上皮细胞中TLR4 的表达[2-4]。作为Ang Ⅱ受体拮抗剂的他索沙坦可能通过抑制TLR4 对肾脏纤维化起到调控作用。缺氧缺血是肾脏纤维化中导致细胞凋亡和炎症反应的重要原因之一[5-7]。糖氧剥夺细胞模型多被用于在细胞水平上模拟缺氧缺血损伤的过程，应用此模型可进行药物保护作用机制的研究[8-10]。本研究探讨他索沙坦对人肾小管上皮细胞（HK-2）损伤的保护作用和机制。

1 材料与方法

1.1 材料

HK-2 细胞购于美国模式培养物保藏所；他索沙坦（货号：B-WM831）购于上海贤鼎生物科技有限公司；α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、Ⅰ型胶原蛋白（Collagen Ⅰ，ColⅠ）、纤维粘连蛋白（Fibronectin）、E 钙粘蛋白（E-cadherin）、葡萄糖调节蛋白78（glucose-regulated protein 78，GRP78）、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白（C/EBPhomologousprotein，CHOP）、TLR4 和β 肌动蛋白（β-actin）一抗（货号分别为19245、72026、26836、8426、3177、D46F1、143585、8480），二抗（货号：704S）均购于美国Santa Cruz 公司；pcDNA3.1-TLR4 和空载质粒购于上海生工生物工程有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 细胞培养与分组 HK-2 细胞培养于含1%青链霉素、10%胎牛血清的DMEM/F12 培养液中。对照组为正常培养的细胞；糖氧剥夺组细胞培养于不含血清的无糖培养基，放置于2% O2，93% N2，5% CO2培养箱中培养；……