宋 春，陈 静，2，成虹松，2，李 梅，2，李 涛，程振涛，2*

(1.贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025；2.贵州省动物疫病与兽医公共卫生重点实验室，贵州 贵阳 550025；3.贵州省动物疫病预防控制中心，贵州 贵阳 550008)

2020年8月，贵州省龙里县某猪场的育肥猪群发病，病初精神沉郁、食欲下降、被毛杂乱、呼吸困难，耳部、四肢皮肤轻微发绀，胸下及腹下皮肤出现红斑，后陆续死亡。发病数198头，发病率25%，死亡96头，病死率48.5%。为确诊病因，对5头病死猪进行解剖并采集病料组织，在流行病学调查及初步临床诊断的基础上开展实验室检测诊断，为该养殖场疫病的准确防控提供依据。

1 材料与方法

1.1 检测病料无菌采集猪场5头病死猪的肺脏、淋巴结、扁桃体、肾脏、肝脏组织样品作为检测病料。

1.2 主要试剂猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)通用型实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测试剂盒、猪伪狂犬病病毒(PRV)实时荧光定量PCR检测试剂盒(购自北京世纪元亨公司)；2×TaqPCR MastreMix(购自天根生化科技有限公司)；DNA/RNA提取试剂盒、DL 2 000 DNA Marker(购自大连宝生物工程有限公司)；鲜血营养琼脂培养基(自制)。

1.3 主要仪器T20 型双槽梯度 PCR 仪(购自杭州朗基科学仪器有限公司)、Tanon 1600型全自动数码凝胶成像系统(购自上海天能公司)、HH-2型数显恒温水浴锅(购自常州金坛良友仪器有限公司)、CX33O型OLYMPUS 生物显微镜(购自上海普赫光电科技有限公司)。

1.4 引物参照 GenBank 数据库猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF1基因序列(登录号：KM191124.1)，应用 Primer 5.0 软件，设计1对特异性引物(PCV2-F：5’-CGCTGGAGAAGGAAAAATGG-3’；PCV2-R：5’-AAGGGCTGGGTTATGGTATG-3’)，引物Tm值56 ℃。参照 GenBank 数据库弓形虫(Toxophasma)RH株B1基因序列(登录号：AF179871)，设计1对特异性引物(T-F：5’-CGCTGCAGGGAAGACGAAAGT TG-3’；T-R：5’-CGCTGCAGACACAGTGCATCTG GAT-3’)，引物Tm值55 ℃。引物由上海生工生物工程有限公司合成。……