郭欣硕

（辽宁省现代农业生产基地建设工程中心，辽宁 沈阳110032）

大菱鲆（Scophthalmus maximus）被称为“多宝鱼”，由中国黄海水产研究所于20世纪90年代从英国引进。辽宁省葫芦岛市的大菱鲆产业兴起于2001年，大菱鲆引进葫芦岛后，经过近20年的发展，已成为葫芦岛市的支柱产业之一。惠及很多养殖户，但多年来因未引进原种鱼苗，缺乏适当的健康繁殖技术，致使苗种优势遗传性逐渐退化，疾病发生率逐年增加。养殖户在使用药物时，在病因不明的情况下，大量用药，不仅导致病原菌的耐药性，还产生大量的药剂药渣，疾病问题已成为制约大菱鲆产业可持续发展的主要瓶颈，因此开展大菱鲆耐药性的相关研究势在必行。

1 材料与方法

1.1 实验材料

供试药物为我国目前被用于水产的抗菌药物，包括氟苯尼考、恩诺沙星、甲砜霉素、硫酸新霉素、氟甲喹、盐酸多西环素、磺胺间甲氧嘧啶钠、磺胺甲 唑/甲氧苄啶。药敏试剂板由全国水产技术推广总站提供，病鱼来自葫芦岛市兴城市2个定点养殖场，1龄大菱鲆，30尾；细菌DNA提取试剂盒（Magen）。

1.2 病原菌的分离鉴定

对典型病症个体样品进行解剖，在TCBS培养基中接种，28℃培养24h，观察菌落特征，挑出可疑菌落接种于普通营养琼脂平板，28℃±1℃培养18～24h，经多次纯化，观察菌落特征，初步分离出水生动物源弧菌。用细菌核酸提取试剂盒提取病原DNA，扩增16 sRNA基因，经测序后，通过NCBI比对序列查找相似菌株。

1.3 耐药性分析

依据南京菲恩医疗科技有限公司提供的试剂板说明书，进行药敏分析试验，筛选纯化后单个菌落，制成0.5麦氏单位浓度的菌悬液。……