马泰勒虫RON2基因的原核表达及生物信息学分析
2021-12-17范士龙韦丽婷王金明李思媛呼尔查张梦圆宋瑞其巴音查汗刘丹丹
张 伟,范士龙,韦丽婷,芦 星,王金明,李思媛,呼尔查, 马 英,张梦圆,宋瑞其,张 杨,巴音查汗,刘丹丹
(新疆农业大学 动物医学学院,新疆 乌鲁木齐 830052)
马泰勒虫(Theileriaequi)是一种哺乳动物胞内寄生的血液原虫,属于顶复门梨形虫目(Piroplasmida)[1-2],寄生于马、驴、骡、斑马等马属动物的红细胞和单核巨噬系统的细胞内,由蜱传播[3-4]。该病以高热稽留、贫血、黄疸、淋巴结肿大等为主要临床症状,急性病例多导致流产和死亡[5]。由于媒介蜱的广泛存在,马泰勒虫病的发病率不断上升,流行区域也不断扩大,严重制约了马产业的发展[6]。目前对于该病的防治,主要以药物治疗为主,但不能有效预防该病的感染。病原对宿主细胞的入侵是建立感染体系的重要步骤[7],因此能否有效阻断马泰勒虫对宿主细胞的入侵,是预防该病感染的关键。
关于马泰勒虫所属顶复门原虫入侵宿主细胞的机制,在对弓形虫(Toxoplasma)和疟原虫(Plasmodium)棒状体颈部蛋白(rhoptry neck proteins,RONs)的研究中,通过电镜观察、免疫荧光和免疫共沉淀等方法,证实了 RON2 蛋白能够与其他入侵蛋白发生特异结合,进而参与虫体入侵宿主细胞的过程[8]。RONs由内质网和高尔基体加工合成后转运至棒状体内储存,受Ca2+信号刺激后,在棒状体的颈部经蛋白酶水解加工后分泌到细胞外,包括RON1~RON8[9-11]。其中RON2可与微线体分泌的顶膜抗原1(AMA1)共同作用形成“运动结合体(moving juction,MJ)”[12],并与宿主细胞发生黏附作用,虫体随之进入宿主细胞后形成纳虫空泡,完成入侵过程[11,13]。在梨形虫中,目前大部分研究只针对RON2基因进行序列分析[14],仅在分歧巴贝斯虫(Babesiadivergens)中验证了RON2蛋白与AMA1蛋白互作,并参与了虫体的入侵过程[15];……