崔 凯，白峻峰，公孙鑫，支亚男，王壮壮，姜 琨，贾 明

(1.西安国际医学中心医院胸腔外科，陕西 西安 710100；2.陕西省中医药研究院， 陕西 西安 710003)

肺癌是全世界病死率最高的癌症，侵袭转移是导致其临床治疗失败和预后差的主要原因[1-5]。因此，研究肺癌侵袭转移分子机制具有十分重要的临床意义。Wiskott-Aldrich综合征蛋白家族成员3(Wiskott-Aldrich syndrome protein family member 3，WASF3-AS1)是近年来发现的肿瘤抑制因子，已被证实在各种类型的人类癌症中具有预后评估价值，然而其在非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer，NSCLC)中的表达以及对肿瘤发生、发展的影响与机制目前尚不明确[6-9]。因此，本研究观察WASF3-AS1在NSCLC中的表达及对其侵袭转移的影响并分析其机制。

1 材料与方法

1.1 主要材料 26例临床不同病理分期NSCLC患者的癌组织及癌旁组织。NSCLC细胞系NCI-H1975细胞和正常肺支气管上皮细胞系HBE细胞购自中科院上海细胞库。

1.2 主要试剂 WASF3-AS1抗体(ab13365)、赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1(LSD1)抗体(ab25667)、组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)抗体(ab86657)、蛋白酪氨酸磷酸酶(PTEN)抗体(ab12655)、蛋白激酶B (AKT)抗体(ab2546)、磷酸化AKT(p-AKT)抗体(ab2587)、E-钙黏蛋白(E-ca)抗体(ab43235)、N-钙黏蛋白(N-ca)抗体(ab47643)和磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)抗体(ab10897)均购自Abcam。

1.3 实验方法

1.3.1 细胞培养及转染：取对数生长期的细胞以每孔6×105个细胞接种于6孔板继续培养过夜后转染WASF3-AS1慢病毒载体：取5 μl WASF3-AS1-pc-DNA3.1(+)和Lipofectamine 2000与50 μl Opti-MEM混匀室温静置5 min，将小干扰RNA(siRNA)混合液缓慢加入Lipofectamine 2000混合液中室温避光静置20 min。分别取上述混合液200 μl加入6孔板，37 ℃、5% CO2条件下转染8 h，更换完全DMEM培养基继续培养24 h或48 h，进行后续相关检测，同时设立阴性对照组。

1.3.2 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测mRNA表达：采用组织研磨机将临床NSCLC患者癌组织及癌旁组织样本匀浆后加入TRIzol提取总RNA，反转录获得总cDNA。……