王庆鹏 陈晓英 骆献丽 李 原 刘山崎 张明辉

乐普药业股份有限公司，河南郑州 450000

替格瑞洛主要用于急性冠状动脉综合征（包括不稳定性心绞痛、非ST段抬高心肌梗死或ST段抬高心肌梗死）患者，包括接收药物治疗和经皮冠状动脉介入（PCI）治疗的患者，降低血栓性心血管事件的发生率[1]。替格瑞洛的工艺杂质N，N-二乙基苯胺，被视为遗传毒性杂质[2-3]。遗传毒性杂质是指能引起DNA损伤，导致DNA突变的杂质，严重威胁人类健康，已被广泛关注及严控。主要来源于原料药或制剂的生产过程，如起始原料、反应物、催化剂、试剂、溶剂、中间体、副产物、降解产物等。根据欧洲EMEA、美国FDA和国际药品注册协调会议（ICH）及中华人民共和国药典（四部）关于基因毒性杂质的指导原则等要求[4-5]，液相色谱-质谱联用技术[6-15]具有灵敏度高、分析速度快、结果准确可靠的特点，可以满足痕量毒性杂质检测的要求。本研究建立了LC-MS/MS法，可准确、灵敏地测定替格瑞洛原料药中基因毒性杂质N，N-二乙基苯胺的含量。

1 仪器与试剂

AB SCIEX ExionLC-QTRAP5500高效液相色谱仪-三重四级杆线性离子阱质谱仪（美国AB SCIEX公司）；色谱柱为苯基柱（Ultimate®UHPLC XB-Phenyl，2.1 mm×100 mm，1.8 μm）；MS205DU型电子分析天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）。

甲 醇（LC/MS级 别，Fisher），乙 腈（LC/MS级别，Fisher），甲酸（HPLC级别，Dikmapure），水（蒸馏水，屈臣氏）；对照品：N，N-二乙基苯胺（批号：20170426，纯度：99.5%，国药集团化学试剂有限公司）；替格瑞洛原料药（批号：Q19010701G、Q19010702G、Q19010703G，浙江乐普药业股份有限公司）。

2 方法与结果

2.1 方法条件

2.1.1 色谱条件 液相色谱柱：Ultimate®UHPLC XB-Phenyl（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）；流 速0.3 ml/min；以0.1% 甲酸水溶液为流动相A，以0.1% 甲酸甲醇溶液为流动相B，梯度洗脱（0～1.5 min，5% B→ 70% B；……