丁 磊,陆文静,2,杨彦君,马 欢,吴云锋,*

(1.西北农林科技大学植物保护学院,旱区作物逆境生物学国家重点实验室,农业部西北黄土高原作物有害生物综合治理重点实验室, 陕西杨凌 712100;2.黑龙江省农业科学院水稻研究所,黑龙江佳木斯 154026)

小麦蓝矮病是我国西北麦区一种重要植原体病害，对小麦危害严重(Wuetal.,2010)。该病害由异沙叶蝉Psammotettixalienus持久专化性传播，介体叶蝉传毒成为病害流行的中心环节(顾沛雯等,2007)。明确小麦蓝矮植原体(wheat blue dwarf phytoplasma,WBDp)虫传相关蛋白与何种叶蝉蛋白互作及叶蝉传播小麦蓝矮植原体的分子机制，探索植原体病害防治新途径成为当前面临的关键问题。

作者前期经过序列比对发现，pWBD-2-ORF4(WBDp第2个质粒编码的ORF4,P2-4)与泡桐丛枝植原体虫传蛋白pPaWBNy-1-ORF5的氨基酸序列(耿显胜,2013)一致性为79.14%(Chenetal.,2014)。随后进行虫传和嫁接对比实验，qRT-PCR检测表明传染初期叶蝉传播长春花植株中的P2-4表达量要明显高于嫁接接种WBDp的植株中的，推测P2-4参与WBDp介体传播。但如何影响没有研究报道。因此，本研究构建了异沙叶蝉分离泛素酵母双杂交膜系统cDNA文库，用P2-4蛋白从文库中筛选，获得ATP6等异沙叶蝉互作蛋白；利用RNAi技术沉默互作蛋白，明确互作蛋白在WBDp传播过程中的功能，对于阻断异沙叶蝉的传播过程和WBDp病害绿色防控具有重大意义。

1 材料与方法

1.1 供试材料

WBDp毒源、无毒介体异沙叶蝉由本实验室提供。异沙叶蝉饲养于小麦小偃6号幼苗上，人工气候室控制温度24℃，相对湿度20%～40%，光周期16L∶8D，每15 d更换一次小麦幼苗。NMY51酵母菌株、pNubG-Fe65,pTSU2-APP,pBT3STE,pPR3-N和pOST1-NubI载体质粒购自上海海科生物技术有限公司，T7 RiboMAXTMExpress RNAi System购自Promega公司。……