郭照萌，张 华，张 鹏

（深圳市龙岗区耳鼻咽喉医院耳鼻咽喉科/深圳市耳鼻咽喉研究所，广东 深圳 518172）

鼻咽癌是一种起源于鼻咽黏膜的上皮性癌，并表现出明显的地理差异，70%的新发病例报告在东亚和东南亚。随着治疗技术的发展，鼻咽癌的发病率和死亡率在过去的几十年呈下降趋势。但是由于鼻咽癌固有的侵袭性和隐匿性，60%～70%鼻咽癌患者被诊断时已是晚期，治疗效果不佳。到目前为止，对于晚期鼻咽癌尚无有效的靶向治疗方法。因此探讨鼻咽癌的转移机制，寻找鼻咽癌的治疗靶点具有重大意义。Orai1是钙库调节钙离子内流的关键分子。近年研究发现在多种肿瘤中Orai1异常表达，并且对维持肿瘤细胞的黏附、增殖、侵袭等恶性表型有重要作用。然而，Orai1是否参与鼻咽癌的进展过程仍未阐明。本研究主要探讨了Orai1对鼻咽癌细胞的转移侵袭和上皮-间充质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）的影响，以期为鼻咽癌的治疗提供新的靶点。

1 材料与方法

1.1 材料

RPMI-1640培养基和胎牛血清购于美国Gibco公司；重组表皮生长因子（recombinant human epidermal growth factor，rEGF）、TRIzol、Lipofectamine3000和Fluo-4 AM购于美国Invitrogen公司；Transwell小室购于美国Corning公司；Matrigel基质胶购于美国BD公司；PrimeScript™RT Reagent Kit和TB GreenFast qPCR Mix购于日本TaKaRa公司；角质形成细胞无血清培养基、Orai1抗体和Thapsigargin购于美国Sigma公司；E钙黏蛋白（E-cadherin）抗体、N钙黏蛋白（Ncadherin）抗体和波形蛋白（Vimentin）抗体购于美国Cell Signaling Technology公司；β肌动蛋白（β-actin）抗体购于美国Santa Cruz公司；PCR引物由上海生工合成。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养与转染

人鼻咽癌细胞系CNE1、CNE2、HONE1和5-8F以及人鼻咽上皮细胞系NP69保藏于深圳市耳鼻咽喉研究所。人鼻咽癌细胞系用含胎牛血清的RPMI-1640培养基，人鼻咽上皮细胞系用含rEGF的角质形成细胞无血清培养基，在CO体积分数为5%、37℃培养箱中培养。……