猪圆环病毒3型检测方法研究进展
2021-12-05尹佳彤马湘海袁晨阳
尹佳彤,马湘海,袁晨阳,成 豫
(西北农林科技大学动物医学院,陕西 杨凌 712100)
0 引言
猪圆环病毒目前已知有3个血清型,分别为猪圆环病毒1型(PCV1)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪圆环病毒3型(PCV3)。PCV1一般被认为不致病;PCV2能够引起猪皮炎肾病综合征(PDNS)、断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、呼吸系统疾病、繁殖障碍疾病等;PCV3感染严重危害猪群体健康。本文就PCV3近年来检测方法研究进展进行综述,以期为PCV3检测和研究提供参考。
1 分子生物学检测
近年来,除了常规PCR方法外,还有套式PCR、荧光定量PCR、双重PCR、环介导等温扩增技术等检测技术被应用于PCV3检测。
1.1 常规PCR
常规PCR广泛应用于病毒核酸的检测,是诊断动物疾病的重要方法。姜玲玲等通过不断优化PCR反应体系和反应条件,建立了PCV3 PCR检测方法。该方法具有较高灵敏度,能特异扩增出长度为649 bp的目的片段,扩增的最低模板量为0.143 ng/μL,用该PCR检测方法对屠宰场送检的376份样品进行检测,PCV3平均阳性率达12.9%[1]。该方法对PCV3具有良好的检测效果。
1.2 套式PCR
套式PCR可以降低在错误片段上配对和扩增的概率。张静等使用2对特异性引物,通过两轮PCR反应进行DNA片段扩增,建立了PCV3套式PCR检测方法,该检测方法仅对PCV3检测阳性,最低检测限为17.4拷贝/μL的质粒模板,特异性强、敏感度高、简便易操作,适用于PCV3临床样品检测[2]。
1.3 荧光定量PCR
荧光定量PCR重复性和稳定性良好。徐朋丽等根据Rep基因高度同源保守区,设计1对引物,建立了检测PCV3的SYBR Green Ⅰ 荧光定量PCR方法,该方法PCV3最低检测值为21.9拷贝/μL[3]。陈如敬等同样基于Rep基因设计特异性引物及探针,建立了TaqMan实时荧光定量PCR方法,该方法适用于PCV3检测,其中PCV3的最低检测值为42.2拷贝/μL[4]。……
