刘桂梅，王韦华

(渭南职业技术学院，陕西 渭南 714000)

0 引言

大肠杆菌是一种十分常见的动物肠道寄居群，它广泛存在并且时刻威胁着公共卫生安全[1-2]。试验从陕西关中地区的猪养殖场采集猪源致病性大肠杆菌，对其分别进行分离和鉴定。

1 材料来源

无菌采集陕西关中地区猪养殖场的具有感染症状的濒死猪的内脏40份进行分离与鉴定。

2 菌落培养

将所收集的内脏等器官组织每份取出适量加入稀释液进行研磨后过滤离心，再取其上清液接种在培养基上，维持37℃恒温，菌落培养完成后置于4℃环境下保存以备后续实验使用。

3 革兰染色镜检

无菌条件下取出之前培养完成的菌落，然后使用革兰染色进行镜检，染色步骤分为涂片、初染、媒染、脱水、复染、镜检，涂片过程要维持无菌状态，初染要注意将染液完全冲洗干净，复染要维持染液染色30 s，镜检要等到标本片完全干燥后才可以进行，先使用低倍劲和高倍镜最后使用油镜。再将菌落分别接种到麦康凯培养基、伊红美兰琼脂以及SS培养基上，经过37℃恒温过夜培养，观察菌株的生长情况。

4 抗原血清型鉴定

取上述菌落进行接种，培养基为普通琼脂，接种完成后将其置于37℃恒温环境中培养24 h，然后再使用石炭酸生理盐水冲洗培养基，冲洗下菌苔，将其收集于圆底试管中，制成浓稠的悬液，塞上试管的塞子后，对其进行2 h的121℃高压处理，破坏菌落的K抗原。冷却后使用特定血清对其进行玻板凝集反应，再设置一组生理盐水的混合物作为实验组的对照，观察实验组和对照组是否会出现凝集颗粒，并根据这一现象判断菌落所属的血清型。……