曹逸飞, 李小姣, 曲伟华, 茅云翔，2**, 杜国英**

(1. 中国海洋大学海洋生命学院， 山东 青岛 266003； 2. 海南热带海洋学院水产与生命学院， 海南 三亚 572022)

条斑紫菜是重要的经济海藻之一，为大型多细胞红藻，其叶状体具有精子囊、果孢、营养细胞等多种组织分化。紫菜中分离细胞有多种办法：酶解法，即用海螺酶酶解紫菜获取原生质体，海螺酶是研磨粒蝾螺消化腺制成的粗酶液[1]，这种粗酶液是一种没有准确成分的混合物，酶解效率不稳定且酶解原生质体发育成叶状体细胞比例较低；机械破碎[2]和氧化胁迫法[3]，通过迫使紫菜碎片放散无性的单孢子获得分离的细胞，单孢子可再发育成叶状体。这些方法多是进行大量紫菜处理，其目的是获取大量单孢子而非分离特定细胞，而分离特定细胞时往往进行手工切割[4]，由于实验人员的操作水平和设备条件限制，往往会引入杂质或者取材不均一。目前高等植物中常用激光显微切割技术(Laser Microdessection，LMD)从样品中精确分离特定组织或细胞类型的目的细胞进行后续研究。

本研究中使用的LMD系统型号为Leica LMD 7000，由德国Leica公司制造生产。该系统采用正置显微镜，利用电脑精确控制的355 nm紫外显微激光光束切割样品，收集系统使用样品自身重力收集，不需要借助其他任何装置，同时减少了实验消耗并避免了污染，并可搭载不同类型载物系统完成不同实验。由于该系统只能切割单层细胞，目前多使用石蜡、冷冻切片技术以满足单层细胞样品制备，且需要进行染色处理从而提高不同细胞类型的辨识程度，最低可分离直径1 μm的样品[5]。……