陈天慧 王立娇 刘洋 王世奇 张贺朋 张晶新 顾英俊 崔新燃 王保中

（北京市房山区动物疫病预防控制中心 102488）

非洲猪瘟(African Swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒引起的猪的一种急性、热性、高度接触性传染病。具有病程短和死亡率高等特点，比传统猪瘟病毒致病性更强。自2018年我国发生非洲猪瘟疫情以来，给养猪业造成极大的经济损失。利用荧光PCR检测非洲猪瘟病毒(African Swine Fever Virus,ASFV)是当前诊断最有效的手段，对基层疫情排查、养殖场安全监管、屠宰场宰前检测有重要意义[1]。在开展非洲猪瘟病毒荧光PCR检测过程中，经过长期大量试验，总结出检测环节常见问题及预防措施，为基层兽医实验室开展日常非洲猪瘟病毒检测提供参考。

1 材料与方法

1.1 样品采集

活猪无菌采集EDTA抗凝血或口鼻拭子（pH7.2PBS缓冲液)；病死猪无菌采集肝、脾、淋巴结等组织样品；环境样品采集畜舍墙面、地面、污水、料槽；车辆样品采集运输车辆的车头、车尾、车厢、轮胎等。饲料样品覆盖猪场及饲料厂不同饲养阶段。2019年1月至2020年12月，在房山区生猪养殖过程中共采集23230份样品，其中组织样品25份，抗凝血1805份，口鼻拭子20630份，饲料样品66份，环境样品542份，车辆样品162份。

1.2 检测仪器及试剂

qTower3荧光定量PCR仪，analytikjena公司产品；NPA-32P全自动核酸提取仪，杭州博日科技有限公司产品；HR40-ⅡA2生物安全柜，青岛海尔特种电器有限公司产品；NU-543-300S生物安全柜，美国Nuaire公司产品；SQ510C全自动高压灭菌器，重庆雅玛拓科技有限公司产品；SSW-420-2S型电热恒温水槽，上海博迅实业有限公司产品；Sorvall ST16R高速冷冻离心机，Thermo Fisher公司产品。……