李怡成，王元敏

（1.湖南农业大学生物科学，湖南 长沙 410128；2.烟台市莱阳中心医院感染科，山东 烟台 265200）

肝癌作为临床常见恶性肿瘤，其主要诱发因素包括脂肪肝、肥胖、糖尿病、酒精、黄曲霉毒素、乙肝病毒感染等，死亡率较高，对肝癌患者进行早期诊断与治疗较为重要[1]。HepG2来源于人体肝癌组织，人VASORIN蛋白（VASN）主要表达于肾脏、血管平滑肌细胞等，正常情况下，VASN仅在机体大动脉的血管平滑肌细胞表面呈高表达，少量表达于胎盘与肾脏，微弱表达于肝脏、胸腺、脑、心等，但肝癌发生时，HepG2细胞来源的外泌体中也存在VASN蛋白，HepG2细胞株中VASN蛋白表达水平较高，且肝癌组织、肝癌细胞中VASN蛋白呈高表达水平[2]。乙醇的主要代谢器官为肝脏，其在乙醇长期影响下易受到严重损伤[3]。为阐明乙醇在肝癌发生发展中的作用，本研究旨在分析乙醇对HepG2细胞VASN蛋白表达及其分泌情况的影响，以期为生物学细胞研究等提供有效参考，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料 人肝癌细胞HepG2为本室保存；VASN标准品与VASN抗体由Abnova公司提供；DMEM培养基、胎牛血清购自赛默飞公司；胰酶干粉由科邦兴业提供；超敏发光液由Thermo Fisher提供；Ploy（A）聚合酶来自BioLabs；细胞培养箱为Thermo Scientific产品，高速冷冻离心机由Hitachi公司提供，蛋白电泳仪购自BioRad，紫外分光光度计由Pharmacia提供，实时荧光定量PCR仪由Stratagene提供。

1.2 方法 使用不同浓度乙醇处理液对HepG2细胞进行刺激，分别在24、48、72 h收集细胞，应用荧光定量核酸扩增检测系统（qPCR）检测HepG2细胞VASN信使核糖核酸（mRNA）水平的变化，取超滤浓缩后的样品进行分泌水平检测，分析乙醇对HepG2细胞VASN蛋白表达与分泌水平的影响。……