李元鹏 张英杰 张京伟 郭文姣 刘学庆 孙纪霞*

（1烟台大学生命科学学院，烟台 264005；2山东省烟台市农业科学研究院，烟台 265500）

在影响苹果产量、品质和商品率的诸多因素中，苹果病毒病是重要原因之一[1]，制约了苹果产业的发展[2]。全球的苹果病毒有40多种，且多为复合感染，目前尚无防治苹果病毒病的有效药剂，生产上应用脱毒苗木是最有效的方法。国内科研院所已通过茎尖法和微体嫁接法获得了富士、嘎拉等苹果品种的脱毒原种苗，并建立了脱毒苹果品种保存圃。从脱毒苗保存圃剪取接穗，通过组织培养进行快速繁育，可在短时间内获得大量脱毒种苗，现将脱毒苗组培快繁技术介绍如下。

1 初代培养

当脱毒品种1年生枝条新生芽长至2 cm左右时将其剪下，除去展开的新生叶片，置于流动的自来水下冲洗7 h，用75%(V/V)的酒精浸泡8 s，然后用0.1%的氯化汞（HgCl2）消毒处理10 min，最后用无菌水冲洗5次。将消毒后的茎尖接种到灭菌后的培养基上，配方为2/3MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+6 g/L琼脂 （可再加500 mg/L PVP降低污染率），pH调至5.8后分装到洁净的培养瓶中，每瓶约50 mL。然后在121℃的高压灭菌锅中灭菌25 min。灭菌完成后，待培养基凝固，在超净工作台上接种茎尖，每瓶接种3～5个。接种完成后，置于温度 26 ℃、光强 35 μmol·m-2·s-1、光照14 h/d的条件下培养15 d，期间除去褐化和污染的茎尖。

2 继代培养

将初代培养获得的生长良好的茎尖接种到MS+0.6 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+6 g/L琼脂，pH为5.8的继代培养基上，参照初代培养的操作分装、灭菌。然后在超净工作台上接种，每瓶接种3株，培养环境与初代培养一致。……